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前言 苹果树腐烂病是由Valsa mali Miyabe & Yamada 引起，是危害苹果枝干的世界 害之一， 在各苹果产区均有发生，危害严重，尤其在东亚地区（Sakuma 1990; Uhm and Sohn 1995) 。 该病主要危害主干、主枝，导致皮层腐烂，造成死枝、死树，重者毁园，降低苹果的产量、 品质，严重危害着苹果产业的发展。19世纪末，苹果树腐烂病首次在 北海道发生。20 世 ， 的宫部和 并将其致病菌定名为Valsa mali Miyabe et Yamada，(Tanaka1919) 。 中国苹果树腐烂病菌由三个种类组成，即 Valsa mali Miyabe et Yamada，V. malicola Z. Urb 和 V. persoo （= Leucostompersoo ），而Valsa mali 是由V. mali var. mali （Vmm）和 V. mali var. pyri （Vmp）组成，其中Vmm 各苹果产区普遍存在，是导致中国苹果腐烂病的主要 致病菌 （Zang2012,WangXL2011 ）。 苹果树腐烂病菌属于弱寄生真菌，具有潜伏侵染的特性，一般是从伤口侵入已经 的皮 层组织，但也可从 、果痕和少数皮孔侵入皮层组织，被侵伤口包括修剪伤口、机械伤、 冻伤、日灼伤(Willison 1936; Biggs 1989; Kepley and Jacobi 2000; Adams et al. 2006 ；ChenC 1981)。修剪伤口即剪口，是腐烂病菌侵染的主要途径，由剪口侵染的腐烂病菌潜伏在木质部 导管内，当腐烂病菌生长扩展到达韧皮部突破寄主栓皮层才会导致剪口 的发病，这也是旧病 疤复发和新病疤产生的主要原因，因此一般的化学防治方法很难有效的控制腐烂病的发生和 流行（Tamura and Saito 1982 ；王彩霞2012）。由剪口侵染引起苹果病害的另一重要病菌是 苹果轮纹病菌，危害枝干和果实，造成干腐症状。苹果轮纹病菌除从气孔、皮孔侵入外，更 容易从伤口侵染，尤其是剪锯口的侵染 （ 2009；R.D.Milholland 1972 ）。从剪口侵染 的轮纹病菌可沿着皮层扩展，形成溃疡斑，造成干腐症状，遇到雨季即可产生大量孢子，为 轮纹病的侵染提供了大量菌源( 2013；Sutton T B 1981)。 苹果轮纹病最早发生在 的梨和苹果上，1911 年Grossenbacher 和Dugga 将其定名为 Botryosphaeria ribis Gross.et Dug(Fenner E 1925) 。苹果轮纹病不仅可以侵染枝条也可侵染果实， 造成同心轮纹烂果症状。随着主栽富士品种的大面积种植，轮纹病的危害不断加重，造成采 收前的大量烂果，严重影响了苹果产业发展（ 1999）。随着果实套袋技术的发展，果实 轮纹病得到了有效控制，但枝干轮纹病日趋加重，而且随着树龄的增大，枝干轮纹病的危害 逐渐加重， 苹果主产区造成了严重的经济损失 （国立耘2009）。近几年来， 面 值推广矮化密植栽培技术，结果枝需要不断更新，形成了大量剪口，这为轮纹病菌的侵染提 供了重要途径，造成了苹果苗期带菌，严重危害新建果园的发展。 苹果腐烂病和轮纹病均可通过剪口侵染，造成树体发病，严重削弱树势。目前，对这两种 病菌从剪口侵染的相关机理了解很少，生产上还没有有效的防控措施。本 以剪口的侵染 为突破口，采用人工接种的方法 了 、露时对腐烂病菌和轮纹病菌侵染剪口的影响以 及温度对腐烂病菌在木质部内的扩展的影响，为深入了解剪口处腐烂病菌和轮纹病菌的侵染 规律和枝干病害的防控提供依据和参考。 材料和方法 1.1 病原菌及孢子繁殖 苹果树腐烂病菌( Valsa mali)于（时间）采自（地点），通过切取病健交界处的病组织 转入马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA ）上，获得腐烂病菌。用直径 0.8mm 的毛细管，自菌落 边缘打取菌丝的头部转入PDA 中，获得单菌丝分离菌株， 为LXS080901 。用农杆菌介导 转化法(ATMT)将携带潮霉素 B 磷酸转移酶 (hph)和绿色荧光蛋白表达 (gfp)转入腐烂 病菌，获得转化子 LXS080901-16。经离体和