实验室做细胞常用的细胞固定及染色方法.docxVIP

试验室做细胞常用的细胞固定与染色方法 一、爬片前盖玻片处理方法 对于悬浮培育的细胞，在进行各种染色前常需先制备成涂片。为了保证细胞 在长时间的染色过程中不从载玻片脱落，必需使其坚固贴附于载玻片上。在载玻 片上涂布一层有助于细胞黏附的物质是常常采纳的方法之一。能促进细胞黏附 的物质主要有多聚赖氨酸、铭矶明胶等，这里介绍多聚赖氨酸的涂布方法。 1、将载玻片用玻璃专用洗涤剂（如Decon）浸泡5min,间或振荡。 2、用自来水冲洗5min。 3、以1%盐酸一70%乙醇溶液浸泡5min。 4、烤箱干燥（至此即可用于一般染色）。 5、多聚L-赖氨酸（1:10溶于去离子水）浸泡5min,振荡。 6、入60c烤箱lh,或室温过夜干燥（用于细胞化学、免疫细胞化学及原位 杂交细胞化学）。 二、细胞固定常用方法 固定细胞的目的在于把组织和细胞的原有结构尽可能完整地保存下来，避开 组织和细胞发生降解、自溶、腐败和变形等，使细胞和组织内的各种酶失去活性, 防止细胞和组织的各种分子变性、解离，使细胞的化学物质和酶能精确 定位，并在以后的处理和制片过程中亦不发生转变和破坏。同时，固定还可使细 胞的各局部易于着色，适于观看、长期保存和分析。 .固定组织、细胞的基本原那么：尽可能选用新奇培育物；依据检测工具、对 象、目的和要求选择固定剂和固定方法。 .培育物的预备和固定前处理：各种细胞培育物，如双盖片悬滴培育物、