发育毒性与致畸作用 (2).pptVIP

二、三段生殖毒性试验 用一组试验研究全部生殖毒性的终点是不可能的，所以在决定适当的策略和选择研究设计时，应考虑该受试物和其类似物质所有可能得到的药理学、动力学和毒理学资料。对大多数医药产品来说，三段生殖毒性试验设计通常是适当的。关键因素是各个生殖阶段之间不得有间隔，即在三个有关联的阶段接触受试物的时期至少有一天的重迭，并能直接或间接地评价生殖过程的所有阶段。三段生殖毒性试验由生育力和早期胚胎发育毒性试验，胚体——胎体毒性试验(致畸试验)和出生前后发育毒性试验(围产期毒性试验)三部分组成(下图)。三段的划分是按有害作用诱发的时期，而不考虑检测的时间。 第30页，共60页，2022年，5月20日，3点1分，星期四 Ⅰ生育力和早期胚胎发育毒性试验 Ⅱ胚体——胎体毒性试验(致畸试验) Ⅲ出生前后发育毒性试验 第31页，共60页，2022年，5月20日，3点1分，星期四 1、生育力和早期胚胎发育毒性试验 1）. 研究目的 评价化学物对配子成熟、交配行为、生育力、胚胎着床前和着床的影响(包括前述生殖发育过程A和B阶段的评价)。雌性包括对动情期、输卵管运输、着床和胚胎着床前阶段发育的影响。雄性包括检测对功能的影响(例如性欲、附睾的精子成熟等)。 2）. 动物 至少一种，首选大鼠。每组性别、每组的动物数应足以对数据进行有意义的解释。建议每组性别各半、每组16~20窝。 3）. 给药期 应说明交配前染毒时间的长度并提供依据。一般采取雄性交配前四周开始重复染毒，直至交配成功。若要保证雌性受孕成功，雄性也可继续染毒，仍同笼至处死。雌性交配前两周开始染毒(可覆盖至少两个完整的动情期)直至着床。 第32页，共60页，2022年，5月20日，3点1分，星期四 4）. 交配及受孕检查 雄大鼠给药4周，雌大鼠给药2周后开始同笼。交配期2~3周，交配比例1∶1。实验程序应能识别出各窝的2个亲本，以避免不正确结果的分析和解释。 5）. 终末处死 雌性一般在孕中期第13-15天终止妊娠。雄性在证实交配并受孕成功后处死检查。 6）. 观察项目 染毒期间观察雌、雄亲代(Po)体征和死亡(至少1次／日)，体重和体重改变(至少2次／周)，摄食量(1次／周)，镜检雌性阴道涂片(交配期间1次／天)和其他毒性研究中见到的靶效应。 7）. 结果评定 综合对F0代观察的各项指标和参数，用合适的统计方法分析和评价。在分析对胎体(子一代，F1)的影响时，应考虑下述参数：各组受影响的窝数比；每窝受影响的胎体的组平均百分率；受影响胎体总数比。 第33页，共60页，2022年，5月20日，3点1分，星期四 2、胚体—胎体毒性试验(致畸试验) 1）. 研究目的 评价母体自胚泡着床到硬腭闭合期间接触受试物对妊娠雌性和对胚体—胎体发育的有害影响，即前述生殖发育过程中的C和D阶段，主要包括增强了与非妊娠雌性有关的毒性，胚体—胎体死亡、生长改变与结构异常。 2）. 动物 通常用两种，一种是啮齿类，首选大鼠，另一种是非啮齿类，最好是兔。若仅用一种动物，需提出正当理由。每组动物数应足以对数据进行有意义的解释。建议每组16~20窝。雌性宜用性成熟的，未交配过的动物。 3）. 给药期 从着床期到硬腭闭合，即器官形成期，大、小鼠孕期的第6~15天，兔孕期的6～18天。 第34页，共60页，2022年，5月20日，3点1分，星期四 4）. 终末处死与标本制作 在分娩前一天处死怀孕母体，以防止自然分娩后，母体吞食畸形子。剖腹检查亲代受孕情况和胎体发育。除逐个检查所有胎体的存活和畸形外，尚需分别检查软组织和骨骼的异常。将每窝50％胎仔经茜素红染色后，作骨骼检查。另外50％胎仔经Bouin’s固定后，作内脏检查。当使用新鲜标本的显微解剖技术(microdissec-tiontechniques)检查软组织改变时(对家兔胎体检查的最好方法)，100％的家兔胎体均作软组织和骨骼检查。 第35页，共60页，2022年，5月20日，3点1分，星期四 5）. 观察项目 染毒期观察妊娠动物的体征和死亡(1次／日)，体重和体重改变(2次／周)，摄食量(1次／周)和在其他毒性研究中已证实的重要靶效应。有流产和早产征兆者处死并进行肉眼检查。 处死时对所有妊娠动物进行尸体解剖和肉眼检查任何结构异常或病理改变。保存肉眼发现有改变的脏器，以便进行组织学评价，亦保存足够的对照组的相应脏器，以供比较。取出子宫，称带有胎体的子宫重，以得出妊娠雌性动物的净增重。计数黄体数，吸收胎数，活胎数与死胎数及着床点，称胎盘重并作肉眼评价，必要时可作组织学检查。称活胎体重，检查胎体性别，以及外观、内脏和骨骼畸形。 第36页，共60页，2022年，5