合成生物学 课件 第四章 合成生物学基础研究4.5~4.9.ppt

为了便于检测，C. J. Bashor等还在通路中加入了能够产生荧光蛋白的基因模块。 调控蛋白对酵母交配MAPK同路的调控作用 在性信息素α因子诱导下，跨膜受体Ste2指导选择交配突起位点。通过G蛋白激活Ste20蛋白（其中Ste为G蛋白β亚基）将信号由Ste11、Ste7、Fus3一次磷酸化传递到目的因子，目的因子进入核区作为转录因子调控细胞和中的PFUS1启动子的启动，控制其下游绿色荧光蛋白的表达。 为了实现对支架蛋白的调节，在Ste5支架蛋白的C端融合了一个亮氨酸拉链结构的新蛋白募集位点，称Ste5-zipper；在调控蛋白（modulator）上融合与其互补的另一段亮氨酸拉链结构，亮氨酸拉链的疏水作用能够使调控蛋白和支架蛋白互补配对的部分形成异源二聚体，实现两者的结合，由此即可利用调控蛋白调节通路的输出。 Ste5-Zipper(A)与亮氨酸拉链激活蛋白域调控区DNA相结合(B)的示意图 A Ste50是一个正调控蛋白，作为适配子租金MAPKKK Ste11与其上有激活因子Ste20的相互作用，提高激活通路的稳态输出。 Meg5是一个负调控蛋白，作为MAPK通路中的磷脂酶使磷酸化的Fus3失活而降低通路输出。Meg5的作用非常强烈，甚至可以使通路对于任何输入激励均无响应。 当通过亮氨酸拉链相互作用人工重新募集到Ste5支架上时，Ste50和Msg5即可对通路输出产生强烈的调节作用。 调控蛋白调控能力检验图 负反馈合成电路的强度可以通过改变招募亲和力或负调控器的表达水平来调节 为了能够人工阻止调控蛋白的作用，构建了亮氨酸“诱捕拉链”（decoy-zipper），通过decoy-zipper竞争性相互作用组织调控蛋白与支架蛋白的结合而达到调控回路的目的。 Decoy-zipper具有更高的亲和力，当通路激活以后，新表达的负调控蛋白Msg5首先与decoy-zipper结合，只有当decoy-zipper饱和后，多余的负调控蛋白才会与支架结合抑制通路输出。 由此，通过改变调控蛋白decoy-zipper的表达水平、启动子的强度等能够以支架蛋白为平台，使MAPK通路具有不同的动态输出，从而实现一系列复杂功能。 1.脉冲发生器功能 2.加速器功能 3.延时器功能 图A 控制群体数量的基因线路图。有IPTG控制的Plac/ara-1启动子控制luxI基因和luxR基因的表达。luxI表达的产物按一定速率催化合成信号分子AHL并迅速扩散出细胞外。当环境中的信号分子浓度达到或超过某一阈值后，luxR表达的产物LuxR与信号分子结合启动启动子PluxI。PluxI之后的lacZα-ccdB融合基因表达出LacZ-CcdB融合蛋白，其中的lacZ部分用于检验融合蛋白表达量，而CcdB部分可使DNA解旋酶失活，引起细胞程序性死亡。 图B 质粒结构图。质粒pLuxR12包括由IPTG控制的Plac/ara-1启动子、催化信号分子生成酶的编码基因luxI、其产物接收环境中信号分子并与之结合控制下游基因表达的luxR基因。质粒pluxCcdB3包含有受启动子PluxI调控的Plac/ara-1融合基因。 * 在性信息素α因子的诱导下，交配因子受体指导选择交配突起的位点。通过G蛋白激活Ste20蛋白将信号经由Ste11（MAP kinase kinase kinase, MAPKKK）、Ste7（MAP kinase kinase, MAPKK）、Fus3（MAP kinase, MAPK）组成的MAPK模块传递到Far1和Ste12等因子，调控相关基因的转录，抑制原有的出芽位点，选择新的生长位点，并使细胞周期停止在G1期。G蛋白与Cdc24、Cdc42、和Bem1等蛋白质作用，使肌协蛋白细胞骨架在交配突起处聚集，呈极性化分布，细胞发生极性生长。 * 合成生物学 北京理工大学 生命学院 合成生物学概述 合成生物系统的设计 合成生物系统的数学模拟与性能分析 合成生物学的基础 合成生物学的应用研究 最新案例与讨论 提纲 第二部分 其他方面的合成生物学研究 合成生物学的目的是通过各种人工生物体的应用解决环境、能源、健康等方方面面的问题。因此，除了上述迷你逻辑功能的遗传线路设计以外，其他方面的合成生物学基础研究同样备受关注。 4.5 控制群体数量的基因线路 群体感应（quorum-sensing）现象，当生物形成的群体达到一定数量时，群体中细胞分泌的信号分子也会积累到一定浓度，此时，群体感应系统会对信号分子做出相应的响应，调节微生物群体行为。 加州理工学院的Lingchong.You 等(2004年)基于以上机理，在大肠杆菌中构造了利用信号感应系统调控细胞凋亡来控制细胞群体浓度的基因路线。此研究将单个细胞基因线路的作用结果扩散至细胞