CTAB法提取DNA简要步骤.docVIP

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2022-07-18 发布于湖北
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CTAB法提取DNA简要步骤.doc

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1,取超低温保存的叶片样本,研钵磨碎后加入2.0ml离心管中(加入的叶片粉末量没过2.0ml 离心管的底部的尖端即可)。 2,迅速加入65℃预热过的CTAB 800μl(2%CTAB,使用前加入0.5-1% β-巯基乙醇),混合均匀后放入65℃水浴一小时。每十分钟摇动一次,使CTAB与叶片样本充分混匀。3,取出离心管至常温,放置2分钟后加入800μl氯仿/异戊醇(24:1)混合液,将混合液与CTAB混匀后缓缓摇动1-2分钟,使CTAB与氯仿充分接触。 4,12000rpm离心5-10分钟,小心吸取上清液至新的2.0ml离心管中,再次加入700μl氯仿/异戊醇混合液,缓缓混匀1-2分钟后,再次离心,吸取上清液至1.5ml离心管中。5,迅速向1.5ml离心管中加入等体积的-20℃预冷过的异丙醇,混匀,-20℃放置2小时左右。 6,将-20℃保存的离心管取出,12000rpm离心5-10分钟,弃去液体,DNA应沉淀在离心管底部。 7,加入1ml 70%乙醇洗涤DNA沉淀(甩一下离心管让DNA沉淀飘起来就行),洗涤两次。 8,将乙醇洗涤过的DNA风干(超净工作台吹一下或者真空浓缩仪)。 9,风干后用50-80μl ddH2O溶解,待用。本步骤一定不要多加水,SNP需要较高浓度DNA。