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实验室质控菌株复苏保存相关常见问答 微生物实验室如果从事致病菌检测、培养基质控验收、方法验证等相关工作，就应该备有质控菌株。实验室需对使用的质控菌株进行规范性管理，以便有效地、安全地使用，保证实验结果的准确性，今天环凯为大家总结了实验室质控菌株复苏保存过程中常见的问题。1. 菌株保存的是第三代，-80℃保存，再取出来活化的话属于第几代？答：保存的是第三代复活出来后，如果采用平板或肉汤活化相当于转接了一代，就是第四代了，如果还在瓷珠里的话就还是原来的代数。如果是保存在斜面上，这一支斜面一直就是第三代，如果转接到另一支斜面就是第四代了。传代原则，菌株活化复苏不论以任何形式繁殖了一次就算是传了一代。但如果仅是物理位置的转移没有繁殖就不是传代，需要注意。2. 菌株传代保存到瓷珠里一定要挑单菌落吗？答：不一定非挑单菌落，但是一定要挑相同特征的菌落，就是说从同一个菌落纯化出来的，以保证它们的特性完全一致。原则是尽量多挑，宁多勿少。3. 菌株冷冻保存是-70℃还是-80℃有具体标准规定么？答：其实是有标准的，《SN/T 2632-2010 微生物菌株常规保藏技术规程》是关于菌株保藏的一个标准，大家可以学习一下，各个保存方式都有介绍，但是瓷珠是比较新兴的保存方式暂时里面还没有收录。4. 怎样延长质控菌株的保存时间呢？答：大量的实验证明质控菌株在低温、干燥、缺氧、缺营养的条件下保存效果是最好的，越接近这种保存条件，菌株的保存时间越长。5. 怎样纯化质控菌株？答：纯化就是从TSA上或别的非选择性平板上转挑取单菌落划线再分离出单菌落，这就相当于纯化了。6. 我们只保存第一代菌株是不是要重新传代保存呢，认证老师会不会认为这是个错误？答：应该不会，认证老师不会提出这种问题的，不过最好是第一代菌株保存一些、第二代菌株保存一些，使用时工作菌株最好使用第三代菌株，第一代菌株可作为长期保存用。7. 为何要将第三代作为工作菌株？答：多传代几次后菌株的活力会明显提高，但最多传代到第五代后就不能用了，因为第五代后菌株虽然不会完全变异，但变异率会明显增加，因此选用第三代作为工作菌株是比较合适的，若使用第一、第二代菌株活力没有那么强。8. 质控菌株是不是传代超过五代就必须销毁处理？答：不一定。传代超过五代只是存在菌种变异可能，但如果传代到第六代、第七代……，经过形态、生化特性、DNA特征等验证，性状保持稳定，那么这些五代后的菌还是可以正常使用。9. 菌种编号意义？答：以金黄色葡萄球菌CMCC（B）26003为例CMCC为中国医学菌种保藏中心缩写，其它常见菌种保藏中心还包括ATCC（美国标准菌种收藏所）、CICC（工业微生物菌种保藏中心）、FSCC（食品安全菌种保藏中心）；B的意思是细菌，对应还有F（真菌）；26003为CMCC的保藏编号。10. 同样是金黄色葡萄球菌，ATCC6538与ATCC25923有什么不同？表明其来源不同，生化特性有也有所不同。比如ATCC6538溶血能力较ATCC25923要强。11. 使用磁珠保藏管保存质控菌株，加入菌液摇匀后为什么要吸干菌液？防止剩余菌液冷冻后形成冰晶损伤保存的菌株。12. TSA斜面一般多少度保存，可以放在冷藏里吗？2-8℃保存，放在冷藏是可以的；注意弧菌和绿脓杆菌要放到室温20-25℃保存，否则会很快死亡。13. 复苏冻干质控菌株是否可以采用液体培养基？答：可以，但建议使用平板培养基复苏冻干菌株。有助于分辨复苏出来菌株是否有污染，同时可初步观察菌落形态以鉴定菌株纯度。使用液体复苏的话只能观察到培养基混浊，无法确定是否有污染。14. 复苏冻干质控菌株是否可以采用显色培养基？答：不建议采用显色培养基复苏冻干菌株。冻干菌株复苏需要一个最适生长环境，复苏培养基不能选用选择性培养基或显色培养基，这些培养基里面含有抑菌成分不利于菌株复苏。15. 产气荚膜梭菌做冻存时是否需要保持厌氧状态？答：不需要，产气荚膜梭菌虽属厌氧性细菌，但对厌氧程度要求并不太严格，按照一般菌株冻存方法进行冻存即可。