在液相色谱实验中常见问题以及解决办法.pptxVIP

会计学 1 在液相色谱实验中常见问题以及解决办法 常见问题 - 基线漂移/噪音 - 峰型 - 保留漂移 第1页/共12页 基线噪音 可能的原因： 流通池脏 检测器灯有问题 如果是周期性的，则起源于泵的脉冲 温度对检测器的影响 有气泡经过检测器 第2页/共12页 基线漂移  梯度洗脱  流动相中有污染物  柱中的流动相没有平衡好  体系中有污染物流出 可能的原因： 第3页/共12页 鬼 峰 色谱图上出现的未知的色谱峰，我们称之为“鬼峰”。 出现这种现象的原因包括： 1、流动相中的杂质或是流动相中各组分不互溶； 2、上一次进样的未流出的组份。 3、样品中的未知组份。 第4页/共12页 双峰 可能原因： 1、柱中有死体积 2、过滤片部分堵塞 3、只有一个双峰——组分的共洗脱 4、样品与溶剂不匹配 第5页/共12页 峰展宽 所有的峰都展宽 柱效降低——柱死体积 进样量过大，柱子超载 流动相粘度过大 部分峰展宽 前次进样后流出的组分 大分子量样品——蛋白或聚合物 样品与流动相不匹配 第6页/共12页 拖尾峰 原因： 部分峰拖尾 二次保留效应——残留硅醇基的反应 小峰紧跟在大峰的后面流出 柱头有污染 所有峰拖尾 额外的柱效应 柱损坏 不适当的样品量/溶剂 第7页/共12页 前伸峰 第8页/共12页 I. 所有峰都向低保留值方向漂移（酸、碱、中性化合物） - 键合相流失 - 流动相不稳定 (可能性较小) - 溶剂输送系统 (流速变化) II. 所有峰都向高保留值方向漂移 - 在水/有机溶剂的混合体系中，有机溶剂含量减少 - 柱改变 (可能性较小) - 溶剂输送系统 (流速变化) III. 离子型化合物的色谱峰的保留值漂移 -流动相中挥发性组分损失 (离子强度, pH 漂移) - 柱改变 (键合相或污染) 保留值漂移 第9页/共12页 I. 与流动相有关的问题 - 使用新鲜的流动相 ?pH ?电导 ?色谱性能测试 II. 与色谱柱有关的问题 - 测试新柱 - 用标准的测试混合样测试新柱 - “清洗” 色谱柱后再测 - 考虑样品基质与使用条件对柱稳定性的影响 保留值漂移 第10页/共12页 总 结 如果使用时加以注意，大部分的液相色谱柱的问题是可以预防的 -柱子在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动； 流动相必须是互溶的，无颗粒 要注意流动相的脱气； - 使用保护柱和在线过滤器，并定期更换 - 使用恰当的样品制备方法 - 使用恰当的色谱柱清洗程序 - 不同类型的色谱柱，请选择不同的操作条件 色谱柱需保存在有机溶剂中 (乙腈，甲醇) 尽量避免使用高粘度的溶剂作为流动相 第11页/共12页