基因工程及其应用PPT课件.ppt

基因工程及其应用;基因工程：即 。通俗的说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里， 地改造生物的 。;培育转基因大肠杆菌的简要过程：;培育转基因大肠杆菌的关键步骤：;1、 基因的“剪刀”—限制性核酸内切酶 专一性： 识别特定核苷酸序列，在特定的切点切DNA，具特异性。 作用于：磷酸二酯键， 结果：产生两个黏性末端。 ;CTTCATG AATTCCCTAA ;2.分子针线—DNA连接酶 (DNA linking-enzyme);（2006.台州质检）下列是由限制酶切割形成的DNA片段，能用相应DNA连接酶将它们恢复连接的组合是;使用DNA连接酶制作重组DNA分子;DNA连接酶的作用是：;3、基因的运载体;;从细胞中分离出DNA;第一步：;有两种方法：　　　　　①逆转录法：以信使RNA为模板，在逆转录酶的作用下利用脱氧核苷酸合成DNA(基因)。　　②化学合成法：根据蛋白质的氨基酸顺序推算出信使RNA核糖核苷酸顺序，再据此推算出基因DNA的脱氧核苷酸顺序。用游离脱氧核苷酸直接合成相应的基因。;;基因的针线：DNA连接酶;第三步：;　　(1)检测的意义：鉴别目的基因是否真正导入受体细胞。 　　(2)检测方法：大肠杆菌质粒具有抗青霉素基因（标记基因），只要检测受体细胞具有抗青霉素的能力，就说明导入了目的基因。 　　(3)目的基因的表达：受体细胞表现出特定性状，说明目的基因导入和完成表达过程。;;四、　基因工程的应用;苏云金杆菌;转黄瓜抗青枯病基因的甜椒;;生长快、肉质好的转基因鱼(中国);中国农业大学获得的转基因克隆奶牛;2、基因工程与药物研制;　　胰岛素从猪、牛等动物的胰腺中提取，100Kg胰腺只能提取4-5g的胰岛素，其产量之低和价格之高可想而知。;　　干扰素治疗病毒感染简直是“万能灵药”！过去从人血中提取，300L血才提取1mg！其“珍贵”程度自不用多说。;乙肝疫苗;拓展题： 1.人与细菌是差异非常大的两种生物，为什么通过基因重组后，细菌能够合成人体的某些蛋白质呢？;四、基因工程的应用;从细胞中分离出DNA;3．质粒是基因工程中最常用的载体，它存在于许多细菌体内。某细菌质粒上的标记基因如右图所示，通过标记基因可以推知外源基因(目的基因)是否转移成功。外源基因插入的位置不同，细菌在培养基上生长情况也不同，右图示外源基因在质粒中可插入的位置有a、b、c点。某同学根据实验现象对其插入的位点进行分析，其中分析正确的是 ;2．(2010·江苏生物，27)下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：;(1)一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有________个游离的磷酸基团。 (3)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用Sma Ⅰ切割，原因是 ________________________________________ 。 (4)与只使用EcoRⅠ相比较，使用BmaHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止___________________________________________ ;(5)为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入________________酶。 (6)重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了_____________ 。 (7)为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在__________________ 的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。;解析：本题综合考查基因工程的过程及应用。(1)质粒是双链环状DNA分 子，在SmaⅠ切割前没有游离的磷酸基团，SmaⅠ作用于两个核苷酸之 间的磷酸二酯键，切割产生的DNA片段末端是平末端，因而质粒经切割 后含有2个游离的磷酸基团。 (3)据图1可知，SmaⅠ切割的位点在抗生素抗性基因之中，抗生素抗性基因是标记基因，应尽量避免破坏，据图2可知SmaⅠ切割的位点在目的基因之中，破坏了目的基因，所以不能使用SmaⅠ切割。 (4)用同种限制酶切割后的质粒和目的基因，在基因表达载体构建时，常形成三种连接方式，其中目的基因与目的基因的连接、质粒与质粒的连接是无效的连接，用两种限制酶可避免此类现象