CFX-荧光定量PCR仪操作指南(Bio-rad)(1).docVIP

CFX Manager软件数据分析快速指南 ?定量分析数据浏览 数据分析选项 CFX Manager软件可以自动的扣除从各个孔所得数据的基线。从菜单栏中选择?Settings，选择Baseline Threshold可以改变基线范围。软件会自动计算基线的位置。可以点击并拖动阀值线来手动定位。点击工具栏中View/Edit Plate按钮来编辑孔的内容，可以临时创立新的分群，从分析中增加或删掉一些孔。 图表选项可用鼠标右键点击任何图表来复制或保存图像，或选择?Chart Options来改变轴范围或删除栅格，图 2。点击工具栏中?Trace Styles 定量数据分析显示选项点击数据分析窗口中?Quantitation Data，浏览数据计算和统计，包括每个孔的阀值〔 CT〕和平均值以及复制的标准偏差，图 4。点击任一列的标题进行基于列的行分类。鼠标右键点击电子表格并选择?Sort可进行基于多个列的行分类。鼠标左键点击任一列的标题并向左或向右拖动可以重新排列电子表格中列的顺序。鼠标右键点击电子表格，选择数据输出格式如 text，XML或 Excel输出数据，图 4。从?Quantitation Data下拉菜单中选择?Plate，在反响板栅格模式下显示所选荧光的孔数据。 点击数据分析窗口工具栏中?Report?File并选择?SavePrint  CFX Manager软件基因表达分析快速指南 ?通过严谨的质量控制，您可以使用 Gene Expression Module of CFX Manager软件来评估样品之间靶标浓度的相对差异。这种应用最常用的使用是评估 cDNA样品中靶标的浓度来推断其 mRNA水平。通常，一个或多个参照基因的含量被用来衡量目标基因的水平。参照基因用来校正上样的差异或各样品取样的差异。通过生物学条件的研究，参照基因的表达水平通常不发生变化。 基因表达分析设置 图 1显示各样品孔含单一的荧光，四个复制类群，包含两个不同靶标名称和两个不同的样品名称。指定参照基因 1．点击反响板编辑器中?Experiment Settings或 Gene Expression Module，翻开实验设置窗口，图 2。 ? 2．选择?Targets。 3．点击适宜的检查窗选择将被使用为参照基因的靶标。 4．点击?Show Analysis Settings检查窗，为靶标设置反响扩增效率。 5．Auto Efficiency检查窗被默认设定。如果实验中运行一个标准曲线，从标准曲线中计算得到的扩增效率将在计算中被使用。或者对适宜的靶标输入指定反响扩增效率值，那么计算中将使用这一扩增效率值。 指定对照样本 1．在?Experiment Settings窗口，选择?Samples标签。 2．点击适宜的检查窗，选择在计算中将被作为对照的样本，图 3。对每个基因来说，对照样本的值被指定为 1，同时所有其他样本相对于对照样本的值会被显示出来. ? 基因表达分析 选择分析模式 1．从 Mode下拉菜单中选择分析模式，图 4：? a. Normalized Expression ⊿⊿C〔t〕-靶标基因的相对量可通过样本的参照基因来进行相对量的衡量。 b.相对量⊿C〔t〕-靶标基因的相对量不能被衡量；结果显示的是实验中靶标基因相对于其他样品的基因浓度。 ? 图形选项 1?Graph Data下拉菜单中选择对照相关或零相关的图形数据。在表中，Graph Data选项默认是对照相关。 2?X轴下拉菜单中选择 X轴以 Sample显示或 Target显示。 3?Y轴下拉菜单中选择 Linear，Log2或 Log10作为 Y轴刻度。 4?Scaling Option下拉菜单中选择 Highest，Lowest或 Unscaled。 5?Error Type下拉菜单中选择 Standard Error of the Mean或 Standard Deviation。 6?鼠标右键点击图形菜单项选择择?Sort选项来指定 X轴的显示顺序。 7 鼠标右键点击图形，复制和粘贴图形或保存图形。电子表格选项 8 基因表达分析结果会在电子表格中显示出来，图 5。 ? 9?选择任一列的标题，通过列值对数据进行分类。 10? ?