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 2022年基因组文库的构建 作者 : 眼猿(笔名) 2022年基因组文库的构建 作者 : 眼猿(笔名) 对于高等真核生物而言，基因组DNA十分庞大,基因可达数万个，且基因组成结构复杂，除编码序列，还有非编码序列及调控序列，基因间还存在大量的间隔序列和重复序列，因此，单个目的基因在整个基因组中所占的比例极其微小，除少数例外，绝大多数基因难以直接分离得到。 作者: 眼猿(笔名) 文档编码:CXRGSZFPY — HMNJOCBDN — 这是第2页 对于高等真核生物而言，基因组DNA十分庞大,基因可达数万个，且基因组成结构复杂，除编码序列，还有非编码序列及调控序列，基因间还存在大量的间隔序列和重复序列，因此，单个目的基因在整个基因组中所占的比例极其微小，除少数例外，绝大多数基因难以直接分离得到。 为了解决这个难题，一种可行的方法就是将这个基因扩增，增加成功分离目的基因的可能性。但是由于要分离的目的基因往往是未知基因，因此无法对它进行特异性扩增，只能构建该生物材料的基因文库，然后再根据不同的方法将所需的克隆筛选出来，最后分离得到目的基因。 作者: 眼猿(笔名) 文档编码:CXRGSZFPY — HMNJOCBDN — 这是第3页 为了解决这个难题，一种可行的方法就是将这个基因扩增，增加成功分离目的基因的可能性。但是由于要分离的目的基因往往是未知基因，因此无法对它进行特异性扩增，只能构建该生物材料的基因文库，然后再根据不同的方法将所需的克隆筛选出来，最后分离得到目的基因。 基因组文库 (Genomic library) ： 是指将某种生物体的全部基因组DNA用限制性内切酶或机械力量切割成一定长度范围的DNA片段，再与合适的载体在体外重组并转化相应的宿主细胞获得的所有阳性菌落，这个群体就称为该生物基因组文库。其目 的是分离有用的目的基因 和保存某种生物的全部基因。 作者: 眼猿(笔名) 文档编码:CXRGSZFPY — HMNJOCBDN — 这是第4页 基因组文库 (Genomic library) ： 是指将某种生物体的全部基因组DNA用限制性内切酶或机械力量切割成一定长度范围的DNA片段，再与合适的载体在体外重组并转化相应的宿主细胞获得的所有阳性菌落，这个群体就称为该生物基因组文库。其目 的是分离有用的目的基因 和保存某种生物的全部基因。 第一节 基因组DNA文库的构建 一、基因组DNA文库的类型 根据所选用的载体可以分为： 质粒文库、噬菌体文库、粘粒文库、人工染色体文库（细菌人工染色体文库、酵母人工染色体文库）。 作者: 眼猿(笔名) 文档编码:CXRGSZFPY — HMNJOCBDN — 这是第5页 第一节 基因组DNA文库的构建一、基因组DNA文库的类型 根据所选用的载体可以分为： 质粒文库、噬菌体文库、粘粒文库、人工染色体文库（细菌人工染色体文库、酵母人工染色体文库）。 二、基因组DNA文库的质量标准 一个理想的基因组DNA文库应具备下列条件： 重组克隆的总数不宜过大，以减轻筛选工作的压力 载体的装载量最好大于基因的长度，避免基因被分隔克隆 克隆与克隆之间必须存在足够长度的重叠区域，以利克隆排序 克隆片段易于从载体分子上完整卸下 重组克隆能稳定保存、扩增、筛选 作者: 眼猿(笔名) 文档编码:CXRGSZFPY — HMNJOCBDN — 这是第6页 二、基因组DNA文库的质量标准一个理想的基因组DNA文库应具备下列条件：重组克隆的总数不宜过大，以减轻筛选工作的压力载体的装载量最好大于基因的长度，避免基因被分隔克隆克隆与克隆之间必须存在足够长度的重叠区域，以利克隆排序克隆片段易于从载体分子上完整卸下重组克隆能稳定保存、扩增、筛选 三、基因组DNA文库构建的程序 ①载体DNA的制备； ②高纯度大相对分子质量基因组DNA的提取和大片段的制备； ③高纯度大相对分子质量基因组DNA的部分酶切与脉冲电泳分级分离； ④载体与外源片段的连接与转化或侵染宿主细胞； ⑤重组克隆的挑选和保存。 作者: 眼猿(笔名) 文档编码:CXRGSZFPY — HMNJOCBDN — 这是第7页 三、基因组DNA文库构建的程序 ①载体DNA的制备；②高纯度大相对分子质量基因组DNA的提取和大片段的制备；③高纯度大相对分子质量基因组DNA