口蹄疫诊断和防控技术.ppt

口蹄疫诊断和防控技术 钟映梅 黑龙江省动物卫生监督所 二O一O年六月 口蹄疫概况 口蹄疫(FMD)是由口蹄疫病毒引起的一种急性、热性、高度接触传染性和可快速远距离传播的动物疫病。 侵染对象是猪、牛、羊等主要畜种及其它家养和野生偶蹄动物，易感动物多达70余种。 国际动物卫生组织(OIE)将FMD列在15个A类动物疫病名单之首。 我国将FMD排在14个一类动物传染病的第一位 。 当前疫情形势 国际：韩国连续发生多起口蹄疫疫情，涉及奶牛、羊、猪。日本宫崎县牛场发生口蹄疫疫情。越南、台湾、香港、缅甸均有疫情发生。 国内：全国多个省区发生口蹄疫疫情（18起为缅甸98谱系O型口蹄疫）。 疫情发生的基本原因 1、对猪的致病力强，传播速度快，群体发病率较高。 2、检疫监管不到位，使疫情扩大。 3、防控工作存在薄弱环节。 4、环境条件差，消毒不到位。 口蹄疫病毒粒子三维结构 口蹄疫病毒X—射线晶体衍射结构图 临床症状 主要是口、鼻、蹄、乳头等部位出现水泡。发泡初期，牛有流涎症状，猪、羊表现跛行。 羊 羊的潜伏期为2—8天。 症状轻微，不易被察觉。 口腔粘膜 、舌上时有水泡，但较小，有米粒至豆粒大小。 蹄部病变和牛相似，发生水泡时表现跛行。 口蹄疫病料采集运送 检验样品：水泡皮（液）、O/P液、血液样品 水泡皮采集：选采新鲜、成熟、未破裂或刚破不久的水泡皮，陈旧、结痂或腐败变质的残破水泡皮不好用，甚至不能用。 牛样应采取舌表面的水泡皮，在水泡尚未破溃或刚破溃时，牛的口中少量流涎或不流涎，这是采集病料的最佳时机。 猪样应采取蹄叉部、蹄冠部或鼻镜部的水泡皮，不要采取蹄踵部角质化表皮。 羊的水泡材料较难采集，水泡通常小而分散，需要仔细寻找。 采取水泡皮时应尽量保持无菌，用消毒剪子剪下水泡皮后，置入无菌小瓶中，加入由等量甘油和0.04mol／L磷酸盐缓冲液( PH7.2～7.6)配制成的运输液中，可加入适量抗生素。加盖及用胶带封口，帖上标签， -20℃下保存。水泡皮样品每份至少1-2g。 水泡液采集：用消毒过的注射器从未破溃水泡中吸出水泡液，水泡液应清亮透明，装入灭菌瓶中，(可加入适量的抗生素，如青霉素1000IU／ml，链霉素1mg／m1)，加盖后用胶带封口，贴上标签，冷藏保存。 O/P液的采集 O/P液是动物食道/咽部刮取的粘膜样品。 用于查明牛、羊等反刍动物感染FMD及持续带毒状况。 注意事项 采样前禁食12小时（可饮水）。 食道探杯使用前用2%NaOH溶液浸泡消毒3-5分钟，再用清水冲洗后使用。 采到的样品应立即冷冻保存。 样品保存液 在0.04mol/LPBS 缓冲液中按每升加1%酚红2ml 样品保存液PH值一定要在7.2—7.6之间。 采集过程 O/P液与样品保存液混合后变色 血清样品 无菌采取动物血液10-15ml，分离血清(每头动物不少于2m1)，分装入两个灭菌的离心管里。加盖、封口并贴上标签，编号，置于4℃保存或冻结保存，但不能反复冻融，否则抗体效价下降。包装：与水泡皮／水泡液样品的方法相同。 诊断方法及免疫监测 口蹄疫的实验室诊断主要是病原学诊断和抗体检测两个方面。 病原学检测方法包括 ： 1、补体结合试验 2、RT-PCR 试验 3、反向间接血凝试验 4、间接夹心ELISA 抗体检测方法包括： 1、病毒中和试验 2、正向间接血凝试验 3、 酶联免疫吸附试验(ELISA) (1)液相阻断LB-ELISA：用于检测动物血清的抗体 (2)非结构蛋白抗体间接ELISA：鉴别诊断感染动物与注苗动物 4、 VIA抗原琼脂扩散试验 5、免疫胶体金试验 * *