rna的转录合成学习.pptx

1 原核生物RNA的转录 RNA Transcription in Prokaryotes 转录的基本原则 Basic Principles of Transcription 大肠杆菌RNA聚合酶 Escherichia Coli RNA Polymerase 大肠杆菌δ70启动子 The σ70 promoter 转录的起始, 延伸与终止 Transcription, initiation, elongation and termination 第1页/共55页 2 转录:以DNA为模板,在依赖于DNA的RNA聚合酶催化之下的一系列RNA酶促合成过程叫做转录,包括RNA链的起始、延伸、终止等步骤。 转录的基本原则 Basic Principles of Transcription 第2页/共55页 3 第3页/共55页 4 大肠杆菌RNA聚合酶 RNA Polymerase 第4页/共55页 5 1 α亚基: 核心RNA聚合酶有2个α亚基,由rpoA基因编码. 功能： 1）参与RNA核心酶的组装,尚未发现有明确的转录功能。 2）参与全酶和启动子的牢固结合。 3）当RNA聚合酶核心酶沿着模板移动进行RNA链的延伸时,保证DNA双螺旋的不断地在前面解开,在后面恢复双螺旋。 第5页/共55页 6 2 β亚基: 是RNA聚合酶的催化中心, 由rpoB 基因编码.可能含有两个结构域, 分别负责转录的起始和延伸.具体是 ：结合核苷酸 底物并催化磷酸二酯键形成 证据:(1)抗生素利福平:与β亚基结合,阻止RNA聚合酶 转录的开始; (2)利迪链菌素也与β亚基结合,抑制转录延伸. 第6页/共55页 7 3 β’亚基:是RNA聚合酶的催化中心，由rpoC 基因编码, 负责核心酶与模板DNA的结合。 第7页/共55页 8 4 σ因子: 大肠杆菌中最常见的σ因子是σ70. 特性: （1）与核心酶结合形成了全酶,在启动子识别中 起关键性的作用； （2）原核生物含有多种σ因子，以能识别各种类型的启动子； （3）RNA链延伸至8-9nt时， σ因子就离开核心酶； （4） σ因子数量只有核心酶的30%，因此在任何时刻只有1/3的聚 合酶是全酶。 第8页/共55页 9 5 ω亚基： ω亚基的功能尚不清楚,也有人认为ω亚基对于RNA聚合酶的结构和功能没有太大的影响。 第9页/共55页 10 大肠杆菌σ70 启动子 The σ70 promoter 1. σ70在基因中的位置及序列 为了方便,人们将mRNA开始转录的一个碱基(转录起始点)定为+1,沿转录方向顺流而下均用正值表示;溯流而上的启动子部分,均用负值表示。 第10页/共55页 11 2. σ70的特征 大小40-60bp; -10序列, 也叫pribnow框,含有保守序列 TATAAT, 其中带底线的称为保守T,它存在于目前已知的几乎所有启动子中,一般位于－6(5)到－9(8).该序列是聚合酶启动DNA解旋的序列. 第11页/共55页 12 2. σ70的特征(续上) -35序列, 也叫Sextama框,也是RNA聚合酶覆盖的部分。 RNA聚合酶依靠其σ亚基识别该位点,因此又称为RNA聚合酶识别位点。其保守序列为TTGACA。 第12页/共55页 13 2. σ70的特征(续上) 启动子区域的共同功能: (1) -35序列组成增强与聚合酶σ因子相识别和相互作用的识别区； (2) -10序列直接影响DNA的解旋速度； TTGACA…..16-18bp…..TATAAT…5-8bp...CG/AT -35sequence -10sequence +1 第13页/共55页 14 启动子效率 -10序列和-35序列之间距离的改变影响启动子的活性。间隔17bp活性最强（16-18，15-20bp） 弱启动子没有-35序列。如：lac启动子，lac基因的表达需要一个辅助激活因子受体蛋白CAP(cyclic AMP receptor proteizod) 与靠近启动子上的CRP位点结合，以增强启动子与RNA聚合酶的结合从而进行转录起始。 第14页/共55页 15 转录的起始、延伸与终止