镉、铜对长江华溪蟹SINOPOTAMONYANGTSEKIENSE在细胞和分子水平的影响.docxVIP

镉、铜对长江华溪蟹(SINOPOTAMON YANGTSEKIENSE )在细 胞和分子水平的影响 【摘要】：长江华溪蟹(Sinopotamonyangtsekiense广泛分布在我国的淡 水水域中，镉、铜对该物种的影响在一定程度上可反映出重金属对水 体中十足类甲壳动物的影响。利用最新发展起来的分子毒理学研究技 术，采用体外暴露的方式，研究镉、铜对溪蟹的影响。本实验共分五 个部分：第一部分镉对长江华溪蟹的急性毒性与积累采用原子吸收分 光光度计，测定镉在溪蟹体内的生物积累。结果表明：镉的生物积累 具有选择性，积累的顺序依次为：外壳＞鳃＞肝胰腺＞触角腺〉卵巢； 镉对蟹体的作用具有浓度 一剂量效应关系；但镉对蟹体的时间一剂量 效应关系不很明显。第二部分镉对长江华溪蟹精子发生过程中高尔基 体超微结构的影响应用透射电子显微技术 (TEM)，研究了低浓度镉 (1.87mg/ L)对溪蟹各级生精细胞超微结构的影响。结果表明：各级 生精细胞中高尔基体均有不同程度的变化。 随镉处理时间的延长，高 尔基体数量增多，扁平膜囊减少，膜囊肿大，膜囊逐渐解体；分泌小 泡增多，小泡体积增大。其中，精母细胞表现较为突出，尤其是次级 精母细胞。另外，其他的细胞器如细胞核、线粒体、内质网和溶酶体 也有不同程度的变化。这些变化使精子发生受阻。第三部分镉对长江 华溪蟹精子发生过程中细胞核超微结构的影响应用透射电子显微技 术(TEM)，研究了低浓度镉(1.87mg/L)对溪蟹各级生精细胞中细胞核 超微结构的影响。结果表明：核的形状从正常的圆形或卵圆形，到处 理后形状多样；核膜先肿胀膨大，进而破裂，核孔增多。核内染色质 也受到影响，分布不均匀或聚集成块，核仁有或无。第四部分铜对长 江华溪蟹酯酶同工酶的影响采用聚丙烯酰胺凝胶 (PAGE)电泳，活性 染色的方法，研究了不同浓度的铜处理后对雄蟹三种组织器官 (鳃、 肝胰腺、精巢)酯酶同工酶(EST)的影响。结果表明：雄蟹的鳃、肝胰 腺、精巢酯酶同工酶都出现了不同程度的变化，鳃酯酶同工酶有2条 酶带缺失，相对活性变化不大；肝胰腺和精巢既有新增的酶带又有缺 失的酶带，新增酶带相对活性增强，缺失酶带相对活性减弱，说明铜 对酯酶同工酶既有激活又有抑制作用，并存在组织差异和剂量效应关 系。同时还分析了铜对雄蟹酯酶同工酶影响的可能机理。 第五部分铜 对长江华溪蟹精巢总 DNA的损伤用浓度为 2.43mg/ L氯化铜 (CuCI_2)溶液采用体外暴露的方式处理雄蟹，分别在 10d、25d、40d 随机取3只雄蟹，先用EDTA和70%乙醇作为固定剂固定，然后采 用经典的酚-氯仿法提取精巢总DNA ,以总DNA为模板，进行RAPD 分析。DNA电泳结果显示：铜处理后的精巢遗传物质未出现断裂。 RAPD扩增产物结果表明：铜能使精巢总 DNA的条带发生变化。在 24条随机引物中，一部分随机引物在对照组及处理组模板 DNA的扩 增条带出现了差异，并且随着处理时间的延长，RAPD电泳条带的差 异也越明显。同时还探讨了材料的固定方法和模板 DNA量的确定。 【关键词】：长江华溪蟹积累超微结构同工酶 RAPD镉铜 【学位授予单位】：山西大学 【学位级别】：硕士 【学位授予年份】：2003 【分类号】：X503.22 【目录】：中文摘要6-7英文摘要7-9第一章综述9-141镉对生物体的 影响9-112铜对生物体的影响11-133本文的研究内容和意义13-14第 二章镉对长江华溪蟹的急性毒性与积累 14-201材料与方法142结果 14-183讨论18-20第三章镉对长江华溪蟹精子发生过程中高尔基体超 微结构的影响20-241材料与方法20-212结果21-223讨论22-24第四 章镉对长江华溪蟹精子发生过程中细胞核超微结构的影响 24-271材 料与方法24-252结果253讨论25-27第五章铜对长江华溪蟹酯酶同 工酶的影响27-331材料与方法27-282结果28-313讨论31-33第六章 铜对长江华溪蟹精巢总DNA的损伤33-401材料与方法33-342结果 34-353讨论35-40参考文献40-43图版说明43-46图版46-49致谢49 本论文购买请联系页眉网站。