理学分子水平下的小鼠性取向调控研究介绍.pptxVIP

5-羟色胺： 5-hydroxytryptamine 5-HT或serotonin 第1页/共31页 人体内，首先从血清中发现5－HT： 又名血清紧张素(serotonin),或血清素 第2页/共31页 人体内的5－HT： 5% 中枢神经系统,脑干中缝核群 是5－HT神经元集中的地方 95％ 胃肠道 90% 肠嗜铬细胞 10% 肠道各层的神经丛中 中枢5－HT 外周5－HT 分属两个独立的系统，互不影响 第3页/共31页 体内5-HT的合成 第4页/共31页 Cre/loxP 系统 第5页/共31页 称为loxP 的两个识别位点可以位于不同的DNA 分子上,也可以在同一个DNA 分子上;同一分子上既可以是同向的,也可以是反向的。 loxP 位点中的8bp 间隔区是位点中唯一不对称部位,这种非对称性决定了loxP 位点具有方向性,从而决定了重组的方向性。 第6页/共31页 loxP 位点的性质 在Cre 酶的介导下,Cre/ loxP 定位重组系统在细胞内和离体系统中共有以下3 种工作方式: 第7页/共31页 第一种工作方式的应用： 第8页/共31页 Lmx1b基因对于小鼠大脑中血清素脑细胞的发育具有重大影响。在敲除了该基因的小鼠大脑中血清素脑细胞完全消失。 本实验使用ePet1-Cre删除floxed Lmx1b等位基因。 Floxed即前文所说的在靶基因两端插入loxP位点，是flanked by LoxP的缩写。 ePet1-Cre就是一种cre基因，从而在细胞中表达出相应的cre酶，删去the floxed gene。 本实验共用了四种基因型小鼠： 纯合子ePet1-Cre/Lmx1bflox/Lmx1bflox，即Lmx1b－/－ 同窝幼崽ePet1-Cre/Lmx1bflox/+，杂合子Lmx1b+/－ 野生型Lmx1bflox/Lmx1bflox without ePet1-Cre ，即Lmx1b+/+ 对照组ePet1-Cre without Lmx1bflox，即ePet1-Cre 值得注意的是，只有Lmx1b－/－不能发育出血清素脑细胞，从而中枢神经系统中没有5-HT。 小鼠实验 第9页/共31页 我们首先检验了一只雄鼠对于一只被放进他的笼子中的C57雄鼠是如何反应的。 在Lmx1b－/－雄鼠中，与靶雄鼠交配的百分比显著高于其他三种（1.a）。而且交配前等待时间更短（1.b）、运动频率更高（1.c）、持续时间更长（1.d）。这些结果说明了大脑中血清素神经元的缺失增多了雄-雄交配。 第10页/共31页 雄性小鼠有一种区别对待两性的行为方式，当他们遇到雌性小鼠或者信息素的时候能够发出一种30-110hz的超声波声音（以后简称之USVs），它的功能类似于爱曲以激发雌性的的感觉。 爱的发声练习 第11页/共31页 配偶选择实验 第12页/共31页 如果只面对雌鼠，他们的差别不大 第13页/共31页 接下来又进行了信息素实验和床铺实验，首先是信息素实验： 第14页/共31页 床铺实验 第15页/共31页 也许你会怀疑，失去了5-HT神经元的老鼠会不会变笨了？闻不出味道？分不出雄雌？以下是芝麻油实验、狐狸尿实验和社交实验： 第16页/共31页 社交记忆力实验和雌雄识别实验 第17页/共31页 之前的实验证明了5-HT神经元的作用，下一步我们要探究5-HT的作用。回忆之前讲的关于5-HT的合成步骤。Tph2作用于中枢神经细胞，Tph1作用于外周5-HT。 第18页/共31页 我们采用了Tph2－/－型的小鼠，左图表明大脑中5-HT含量大减。 之后的实验与前文所述的Lmx1b系列实验完全相同 第19页/共31页 雄雄 第20页/共31页 在只面对雌性时，都一样 第21页/共31页 面临抉择时，一种小鼠变了 第22页/共31页 Lmx1b －/－和 Tph2 －/－型的小鼠均是从胚胎期开始缺失5-HT的。为了研究成年期5-HT的影响，我们采用了两种手段：1、用pCBA除去小鼠体内的5-HT；2、试图改变Tph2 －/－的表现型。 pCBA即对氯苯丙氨酸，能够抑制Tph的功能，从而阻断5-HT的合成； HIAA是5-HT的代谢产物 第23页/共31页 pCBA组与盐水组 雄雄实验对比 以及床铺实验 第24页/共31页 现在是第二组实验，注射5-HTP。采用了基因型为Tph2+/+和Tph2－/－两种雄性小鼠。图中5-ＨＴＰ下的＋、－号表示注射５－ＨＴＰ