PCR实验室设计中如何预防污染 ？.pdfVIP

PCR实验室设计的核心问题是如何避免污染。在实际工作中，常见 的有以下几种污染类型：扩增产物的污染；天然基因组DNA 的污染； 试剂的污染以及标本间的污染。由于一旦发生污染，实验就必须停止， 直到找到污染源为止，而且实验结果必须作废，需重新进行实验。所 以发生污染后再围绕实验室来寻找污染源不但耗时而且繁琐，浪费 力物力。因此要避免污染，首先应是预防，而不是排除。到底该如何 才能有效的进行预防呢 ？ 一、工作区域的严格划分 1.各个实验区域设置合理。 2.各个实验区域要有明显的标记（如醒目的门牌或不同的地面颜 色等），以避免各个不同实验区域设备物品、试剂等发生混淆。 PCR 实验室设计通常分为四个单独的工作区域：试剂贮存和准备 区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区、扩增产物分析区。 1、试剂准备区： 用于试验试剂的准备。该区域为正压，目的是防止污染物质溢入。 该区域内部又可分为3个区域：普通提取试剂的准备区、PCR试剂准 备区和PCR主反应液准备区。在普通提取试剂的准备区内准备一些样 品核酸提取时所需的裂解液、提取液等；PCR试剂准备区用于PCR试 剂的制备和保存。例如准备引物、探针等PCR试剂。为了防止交叉污 染，避免反复冷冻和解冻，试剂存贮溶液应该被平均为小的工作体积， 储存