实验十pUC57T载体的制备.pdfVIP

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2022-09-05 发布于湖北
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实验十pUC57T载体的制备.pdf

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实验⼗pUC57T 载体的制备实验⼗ pUC57 T载体的制备⼀．原理 PCR产物的克隆是⼀种有效的克隆⽬的基因的⽅法，但是在实际应⽤中，由于⽅法学上的⼀些技术问题可能限制其应⽤。由于PCR产物3`末端突出⼀个A ，因此克隆PCR产物的载体3`末端必须突出⼀个T ，这样载体与PCR产物之间形成粘性长端。现在许多公司开发出了此类专⽤于PCR产物克隆的T载体。本实验中将平端内切酶EcoRv酶解的EcoRv，⽤Taq酶将其3`末端加上T ，然后⽤T4 连接酶将能⾃⾝环化的质粒连接。⽤凝胶电泳将⾃⾝环化的质粒与3`末端带有T ．不能⾃⾝环化的线性质粒分开，回收线性质粒⽚段