蛋白裂解液分析和总结.docxVIP

RIPA 裂解液配方 1ml RIPA buffer contains 35μl proteinase inhibitor and 10μl phosphatase inhibitor RIPA buffer 最终浓度 1M Tris-HCl 5 ml 50mM NaCl 0.87g 0.15 M Na-deoxycholale 0.1g （%） 0.5M EDTA NaF 41 mg Nonidet P40 1 ml （1%） Aprotinin10μg/μl 100μl 10μg/ml 加水到 100ml Aprotinin 10μg/μl ；用 10mM HEPES-KOH（）溶解，备用。 Nonidet P-40 简称 NP-40，乙基苯基聚乙二醇,常用非离子性去垢剂。 Na-deoxycholale，脱氧胆酸钠，离子型去垢剂。离子型去垢剂主要作用有：裂解细胞；溶解蛋白，尤其是可以溶解一些难溶于水的蛋白，如膜蛋白等；很适合做WB，但在 Co-IP 中使用，需要谨慎。 亮抑霉肽（Leupeptin）：抑制丝氨酸蛋白酶包括胰蛋白酶、纤溶酶、猪胰激肽原酶）和半胱氨酸蛋白酶（包括木瓜蛋白酶和组织蛋白酶B） 抑肽素 A（Pepstatin A）抑制各种天门冬氨酸蛋白酶，例如组织蛋白酶 D、肾素、胃蛋白酶、细菌天门冬氨酸蛋白酶和HIV 蛋白酶； 胰凝乳蛋白酶抑制剂（Chymostatin）抑制具有糜蛋白酶类特异性丝氨酸蛋白酶（包括糜蛋白酶、胃促胰酶、组织蛋白酶 G）和大多数丝氨酸蛋白酶（包括组织蛋白酶B，H，L） 抗木瓜蛋白酶（Antipain）抑制木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和纤溶酶。氟化钠抑制酸性磷酸酶 正钒酸钠：抑制碱性磷酸酶和酪氨酸磷酸酶 （tyrosine phosphatase） 焦磷酸钠 （sodium pyrophosphate）：抑制丝氨酸 -苏氨酸磷酸酶（ serine－threonine phosphatase） 。 蛋白酶抑制剂在与蛋白相关的检测中，首先最关键的一步便是蛋白质的提取。蛋白质的提取过程中，我们 要经常加和蛋白酶抑制剂以防止蛋白质的降解。另外在磷酸化蛋白的研究过程中，磷酸酶抑 制剂也是必不可少的，本文总结了常用的蛋白酶抑制剂 PMSF，Leupeptin 亮肽素，Aprotinin 抑肽酶，Pepstatin 胃蛋白酶抑制剂，EDTA-Na2 等以及磷酸酶抑制剂NaF 氟化钠，Na3VO4 原矾酸钠 ，BETA-glycerophosphate 甘油磷酸钠，Na2P2O4 焦磷酸钠等。对这些蛋白酶抑制剂的溶解配制，贮存液与工作液浓度，保存都做了详细的说明。 蛋白酶抑制剂 PMSF： 特性：丝氨酸蛋白酶抑制剂，如胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶和凝血酶，也抑制半胱氨酸蛋白酶如木瓜蛋白酶（可逆的地面处理）。 溶解性：溶于异丙醇，乙醇，甲醇和丙二醇果10mg/ml。在水溶液中不稳定。在100%异丙醇， +25℃时稳定至少 9 个月分子量： 使用：贮存浓度：200mM，工作浓度：1mM Leupeptin 亮肽素 特性：抑制丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶如胰蛋白酶，木瓜蛋白酶，纤溶酶，和组织蛋白酶B 溶解性：高度溶于水（1mg/ml）。4℃一周稳定,分成小份冷冻在-20℃至少 6 个月 分子量：C20H38N6O4 x 1/2 H2SO4: C20H38N6O4 x 1/2 H2SO4 x H2O: 使用：贮存浓度：1mg/ml，工作浓度 ug/ml (1mM) Aprotinin 抑肽酶 特性：丝氨酸蛋白酶抑制剂，抑制纤维蛋白溶酶， 激肽释放酶，胰蛋白酶，糜蛋白酶的高活性。不抑制凝血酶或因子X。 溶解性：易溶于水（10mg/ml）或缓冲液（例如，tris，0.1M，）。pH 约 7-8 的溶液在 4℃可保存 1 周，分装保存在-20℃可至少保存 6 个月。避免反复冻融, pH的碱性环境可使其灭活。分子量：6,512 使用：贮存浓度:1mg/ml, 工作浓度：– ug/ml– uM) Pepstatin 胃蛋白酶抑制剂 特性：抑制天冬氨酸（酸）蛋白酶如胃蛋白酶，肾素，组织蛋白酶 D，凝乳酶， 许多微生物酸性蛋白酶 溶解性：溶于甲醇约 1mg/ml； 可溶于乙醇，过夜溶解可达到 1 mg/ml；在 6 当量乙酸中溶解度为 300ug/ml。4℃稳定一周，分装储存于-20℃时可保存 1 个月 分子量： 使用：贮存浓度：1mg/ml，使用浓度： μg/ml(1 μM) EDTA-Na 2 特性：金属蛋白酶抑制剂 溶解性：溶于水至，在pH8-9 的条件下，4℃稳定至少 6 个月分子量: 使用：工作浓度：– mg/ml–1.3 mM)，不需现用现配，在溶液pH 值调至 8-9 时再加入。 磷酸酶抑制剂 磷酸酶抑制剂 NaF 氟化钠 溶解