基因工程主要技术原理电泳杂交.pptxVIP

1 分子生物学主要技术 密度梯度超速离心和电子显微镜技术 DNA分子的切割与连接 核酸分子杂交、凝胶电泳、DNA序列结构分析以及基因的人工合成、基因定点突变和PCR扩增等多种新技术、新方法。 DNA分子的切割与连接，是基因操作的核心部分 返回第二章 返回目录 第1页/共33页 2 第一节 核酸的凝胶电泳 1.基本原理 2.琼脂糖凝胶电泳 3.脉冲电场凝胶电泳 返回第二章 返回目录 第2页/共33页 3 2.1.1 原理 电泳及迁移率 核苷酸链多聚阴离子 在生理条件下，核酸分子的糖一磷酸骨架中的磷酸基团，是呈离子化状态的。相同分子量的双链DNA 几乎具有等量净电荷 无反应活性的稳定的介质 降低了对流运动，故电泳的迁移率又是同分子的摩擦系数成反比的。已知摩擦系数是分子的大小、极性及介质粘度的函数，分子大小的不同、构型或形状的差异，所带的净电荷的多寡，便彼此分离开来。 第3页/共33页 4 2.1.2 琼脂糖凝胶电泳 琼脂糖为线性多糖聚合物，红色海藻产物琼脂中提取而来。琼脂糖溶液加热到沸点后冷却凝固，密度由浓度决定的。 分辨能力同凝胶的类型和浓度有关:琼脂糖凝胶分辨 范围为0．2～50kb之间. 第4页/共33页 5 不同浓度琼脂糖凝胶的分辨能力 凝胶类型及浓度 分离DNA片段的大小范围（bp） 0.3％琼脂糖 50 000～1000 0.7％琼脂