分子生物学基本实验操作.pptxVIP

克 隆 操 作 HEADLINE PCR 技术 实验中一些好的习惯 1 2 3 4 核 酸 抽 提 第1页/共53页 1 核酸抽提 1.1 总RNA抽提 1.1.1 原理 利用强变性剂异硫氰酸胍迅速裂解组织（或细胞），促 使核蛋白与核酸的解离，并迅速抑制细胞内的RNA 酶；经 酸性苯酚-氯仿抽提，异丙醇沉淀可获得完整的RNA。 第2页/共53页 1.1.2 相关器皿的处理 1.1.2.1 塑料制品的处理 已经标明RNase-Free的塑料制品，如果没有开封使用过，可以直接使用。对于国产 塑料制品，都必须处理方可使用，步骤如下： 1）在玻璃烧杯中注入双蒸水，加入DEPC使其终浓度为0.1%，磁力搅拌0.5小时； 2）用1）浸泡需要处理的塑料制品，在通风橱中处理过夜； 3）弃将DEPC水，用铝箔封住处理过的塑料制品，高温高压灭菌至少30 min； 5）100℃烤至干燥，置于干净处备用。枪头必须在无菌操作台中，用镊子装入枪头 盒。 第3页/共53页 1.1.2.2 玻璃和金属制品的处理 用去离子清洗干净，用锡箔纸包好，然后至烘箱中250℃烘烤3小时以上 或者180℃烘烤8小时以上。 1.1.2.3 电泳槽的处理 用于RNA电泳的电泳槽应用去污剂洗干净，再用水冲洗，用乙醇干燥，然后灌满 3%的H2O2溶液