蛋白质与dna的相互作用.pptVIP

寡核苷酸设计与合成： 1.AAGAATTC—NNNNNNNNN—GGATCCAA 2. 引物合成 3.标准结合反应寡核苷酸的合成 4.电泳回收 探针标记： 合成的含随机序列的单链寡核苷酸 3‘引物 32PdCTP dNTP(不包括dCTP) Klenow酶 电泳纯化 凝胶阻滞试验纯化探针 1.蛋白质与标准结合寡核苷酸结合 蛋白质与随机寡核苷酸结合 电泳（样品隔开，防污染） 2.凝胶回收 3.酚、氯仿去蛋白 4.PCR（底物加32PdCTP） 5.PCR产物再做凝胶阻滞试验，反复纯化 特异结合序列的克隆和序列分析： 酶切随机核苷酸序列与质粒重组 用引物对质粒序列进行分析 N1 N2 N3 N4 N5 A 14/0.32 13/0.30 4/0.11 5/0.11 14/0.32 C 9/0.21 12/0.27 23/0.52 26/0.59 7/0.16 G 4/0.01 6/0.14 6/0.14 9/0.21 19/0.43 T 17/0.39 13/0.30 11/0.25 4/0.01 4/0.01 T/A