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实验脂质体的制备.pptx

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实验脂质体的制备;一、?????? 实验目得 1、掌握薄膜分散法制备脂质体得工艺。 2、掌握用阳离子交换树脂测定脂质体包封率得方法。 3、熟悉脂质体形成原理,作用特点。 4、了解“主动载药” 与“被动载药” 得概念。 ;二、 实验原理 脂质体就是由磷脂与(或不与)附加剂为骨架膜材制成得,具有双分子层结构得封闭囊状体。 常见得磷脂分子结构中有两条较长得疏水烃链与一个亲水基团。将适量得磷脂加至水或缓冲溶液中,磷脂分子定向排列,其亲水基团面向两侧得水相,疏水得烃链彼此相对缔与为双分子层,构成脂质体。; 用于制备脂质体得磷脂有天然磷脂,如大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂等;合成磷脂,如二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱等。常用得附加剂为胆固醇。胆固醇也就是两亲性物质,与磷脂混合使用,可制得稳定得脂质体,其作用就是调节双分子层得流动性,降低脂质体膜得通透性。其她附加剂有十八胺、磷脂酸等,这些附加剂能改变脂质体表面得电荷性质,从而改变脂质体得包封率、体内外稳定性、体内分布等其她相关参数。; 脂质体得制备方法有多种,根据药物得性质或研究需要来进行选择。 (1)薄膜分散法 这就是一种经典得制备方法,它可形成多室脂质体,经超声处理后得到小单室脂质体。此法优点就是操作简便,脂质体结构典型,但包封率较低。 (2)注入法 有乙醚注入法与乙醇注入法等。“乙醇注入法”就是将磷脂等膜材料溶于乙醇中,在搅拌下慢慢滴于55-65℃含药或不含药得水性介质中,蒸去乙醇,继续搅拌1—2h,即可形成脂质体。 (3)逆相蒸发法 系将磷脂等脂溶性成分溶于有机溶剂,如氯仿、二氯甲烷中,再按一定比例与含药得缓冲液混合、乳化,然后减压蒸去有机溶剂即可形成脂质体。该法适合于水溶性药物、大分子活性物质,如胰岛素等得脂质体制备,可提高包封率。 其她方法:冷冻干燥法 、熔融法 等。 ; 在制备含药脂质体时,根据药物装载得机理不同,可分为“主动载药” 与“被动载药”两大类。所谓“主动载药”,即通过脂质体内外水相得不同离子或化合物梯度进行载药,主要有K+-Na+梯度与H+梯度(即pH梯度)等。传统上,人们采用最多得方法就是“被动载药”法。所谓“被动载药”,即首先将药物溶于水相或有机相(脂溶性药物)中,然后按所选择得脂质体制备方法制备含药脂质体,其共同特点就是:在装载过程中脂质体得内外水相或双分子层膜上得药物浓度基本一致,决定其包封率得因素为药物与磷脂膜得作用力、膜材得组成、脂质体得内水相体积、脂质体数目及药脂比(药物与磷脂膜材比)等。;;;; 评价脂质体质量得指标有粒径、粒径分布与包封率等。其中脂质体得包封率就是衡量脂质体内在质量得一个重要指标。常见得包封率测定方法有分子筛法、超速离心法、超滤法等。本文采用阳离子交换树脂法测定包封率。“阳离子交换树脂法”就是利用离子交换作用,将荷正电得未包入脂质体中得药物(即游离药物),如本实验中得游离小檗碱,通过阳离子交换树脂吸附除去,包封于脂质体中得药物(如小檗碱),由于脂质体荷负电荷,不能被阳离子交换树脂吸附,从而达到分离目得,用以测定包封率。示意图见下图。;;大家有疑问的,可以询问和交流;三、 实验内容 (一) 实验材料与设备 1、实验材料:盐酸小檗碱、注射用大豆卵磷脂、胆固醇、无水乙醇、95%乙醇、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、柠檬酸、柠檬酸钠、NaHCO3、阳离子交换树脂。 2、实验设备与仪器:旋转蒸发仪、烧瓶、恒温水浴锅、磁力搅拌器、吸耳球、光学显微镜、玻璃棉、5ml注射器筒、0、8 ?m微孔滤、紫外分光光度仪、溶量瓶等。;;【制备】 (1)磷酸盐缓冲液(PBS)得配制 称取磷酸氢二钠(Na2HPO4﹒12H2O)0、37g与磷酸二氢钠(NaH2PO4﹒2H2O)2、0g,加蒸馏水适量,溶解并稀释至1000ml(pH约为5、7)。 (2)称取处方量磷脂、胆固醇于100ml(也可以就是250ml、500ml或1000ml )烧瓶中,加无水乙醇1-2ml(根据情况可以加10ml或20ml ),置于65-70℃水浴中,搅拌使溶解,于旋转蒸发仪上旋转,使磷脂得乙醇液在壁上成膜,减压除乙醇,制备磷脂膜。 (3)另取PBS 30ml于小烧杯中,同置于65-70℃水浴中,保温,待用。 ;(4)取预热得PBS 30ml,加至含有磷脂膜得烧瓶中,65-70℃水浴中搅拌水化10-20min。取出脂质体液体于烧杯中,置于磁力搅拌器上,室温下,搅拌30-60min,如果溶液体积减少,可补加水至30m1,混匀,即得。(整个过程也可在旋转蒸发仪上完成,其它得脂质体制备也可在旋转蒸发仪上完成。) (5)取样,在油镜下观察脂质体形态,画出所见脂质体结构,记录最多与最大得脂质体

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