《分子生物学研究法》.ppt

分子生物学研究法;;一.重组DNA技术概论; 二.常见的DNA操作技术;琼脂糖凝胶电泳;琼脂糖凝胶电泳的原理;琼脂糖凝胶电泳用途;;琼脂糖凝胶电泳技术要点;SDS电泳;SDS电泳原理;;;SDS电泳用途;SDS技术要点;PCR技术;PCR技术原理;PCR技术应用;PCR技术操作要点;杂交技术;Southern blot , Northern blot和Western blot 比较;Southern blot;Northern blot;Western blot;双脱氧法测序(Dudeoxy sequence analyses);;;;2.1 细菌转化;2.2 PCR(聚合酶链式反应) 技术;PCR;2.3 cDNA文库;cDNA文库建库过程;;说明: 引物 oligo dT , 随机引物R6 (得到全长cDNA) 两???可加上酶切接头,便于克隆到载体上. 合成时,原料用甲基化的dCTP. 防止酶切时损伤内部序列. 转化效率要高, 防止少量表达的mRNA未得到克隆.;2.4 SNP技术及应用;Single nucleotide polymorphism;SNP的特征 ;SNP的检测方法 ;;荧光共振能量传递(fluorescent resonance energy transfer, FRET);;SNP数据库 ;2.5基因打靶(gene targeting);基因打靶的必备条件;基因敲除的基本程序;;基因敲除 Knockout;基因敲除的缺点;三.基因克隆技术(狭义)获取目的基因的技术;3.1 RACE 技术;;3’ RACE (非mRNA扩增);;3.2 cDNA差示显示法(cDNA-RDA);;3.3 基因大规模克隆技术(Gateway 克隆技术);;;;3.4 酵母双杂交法（蛋白－蛋白相互作用）;;;;３.5 酵母单杂交（蛋白核酸相互作用）;;３.6 基因的图位克隆法;四.基因表达研究技术;4.１.基因表达系列分析技术（SAGE);;4.2. RNA选择性剪切机制;４.3.原位杂交技术;;4.3 定点突变;TaKaRa mutation kit;4.4 RNAi技术;;RNAi的应用 ;RNAi的缺点 ;4.5 生物芯片技术 ;主要特点 ;生物芯片分类 (1) 用途;生物芯片分类 (2) 制造技术 ;六. 蛋白质组学及其研究技术;6.1 双向电泳 ;;6.2 MS质谱技术 ;MALDI-TOF 和 ESI-MS;MALDI-TOF MS 分析21-aa 肽 (理论分子量 2404) ;6.3 Western blotting;;6.4 EMSA;;6.5 噬菌体展示技术;;6.6 免疫共沉淀技术 (CoIP);6.7蛋白质磷酸化分析