叶绿素含量的测定.docxVIP

植物生理学实验报告实验题目：叶绿素含量的测定 姓名班级学号 一、 实验原理和目的 根据朗伯—比尔定律,某有色溶液的吸光度A 与其中溶质浓度C 和液层厚度L 成正比 。叶绿素（丙酮）在 652nm（混合）、663nm、645nm 有最大吸收峰。 叶绿素（95%乙醇）在665nm、649nm，类胡萝卜素在470nm 有最大吸收峰，根据在分光光度计下测定的吸光度，求得叶绿素的含量 二、 实验器具和步骤 植物材料: 女贞 实验器具： 分光光度计;电子天平; 研钵； 试管； 小漏斗；滤纸； 吸水纸； 移液管 ; 量筒； 剪刀 试剂: 95％乙醇（或 80%丙酮)；石英砂;碳酸钙粉 步骤：1.称取剪碎的新鲜样品 0。1g 左右，放入研钵中,加少量石英砂和碳酸钙粉及 3～5ml 95％乙醇,研成均浆，继续研磨至组织变白.静置 3～5min 2. 取滤纸 1 张，置漏斗中,用乙醇湿润，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，过滤到10ml 试管中， 用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次,最后连同残渣一起倒入漏斗中。 3。用滴管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入漏斗中。直至滤纸和残渣中无绿色为止。最后用乙醇定容至 10 ml ，摇匀 4。 把叶绿体色素提取液倒入光径 1cm 的比色杯内.以 95％乙醇为空白,在波长 665nm、 649nm、470nm 下测定吸光度 5。 计算公式: 665 649叶绿素的含量（mg/g)= (浓度×提取液体积×稀释倍数）/样品鲜重。Ca=13.95A －6.88A 665 649 649 665Cb=24。96A －7。 649 665 C =（1000A —2。05Ca-114.8Cb)/245 类 470 单位:mg/L 三、 实验数据和作业 2、计算叶绿素含量计算公式： 叶绿素的含量(mg/g)= （浓度×提取液体积×稀释倍数）/样品鲜重。 Ca=13。95A665－6.88A649; Cb=24。96A649－7.32A665 C 类=(1000A470—2.05Ca-114.8Cb）/245 单位：mg/L 由上面的公式进行代入计算，有： Ca=13.95*1.820-6.88＊0。953=18.83236 Cb=24。96*0。953—7.32＊1.820=10。46448 C 类=（1000*1。948-2。05*18.83236-114.8＊10。46448）/245=2。8901 则:叶绿素含量=（29.29684*10＊0。001＊1）/0.1=2。9297 四、 数据分析 实验中可能清洗研钵和滤纸不是特别干净可能造成误差五、 思考题 为什么提取叶绿素时干材料一定要用 80%的丙酮，而新鲜的材料可以用无水丙酮提取？ 答：因为叶绿素存在于叶绿体内囊体上与其上的蛋白质组成色素蛋白复合体，要分离叶绿素和蛋白质必须有水，叶绿素的头部为极性的，有亲水性