干扰素的研究进展.pptxVIP

干扰素是一组具有多种功能的免疫活性蛋白质， 主要是糖蛋白，有抗病毒、抗肿瘤、免疫调节和控制细胞凋亡等作用。除用于动物疾病的辅助治疗外，还可作为免疫佐剂，增强特异性免疫应答。 干扰素诱导剂作用于活细胞后，由细胞产生的一种蛋白质，当它再作用于其他细胞时， 使其他细胞立即获得抗病毒和抗肿瘤等多方面的免疫力。 干扰素具有严格的动物种属特异性，但它对病毒复制的抑制作用是非特异性的，这种作用对生物制品来说，是独一无二的，如猪瘟病毒产生的干扰素，除抑制猪瘟病毒外，对猪的其他病毒感染同样具有抑制作用。 研究意义 第1页/共12页 一、干扰素基因工程研究进展 二、在治疗畜禽疾病上的应用 三、最新研究 四、干扰素剂型及临床应用 国内外研究动态 第2页/共12页 国外 1979年：Taniguch克隆出 IFN- β 1980年：Derynck克隆了人干扰素基因 1981年：Goeddel报道IFN- γ克隆成功 1982年：Deuagerr\人工合成干扰素基因并克隆成功 1982-1985年：侯云德成功表达出干扰素 陈炬等把人IFN- α基因在烟草植株中表达 柴玉波构建新型双顺反子表达载体PEC-34 张奉学构建了人IFN- γ植物双元表达载体 夏春克隆测序了猪IFN- β 干扰素基因工程研究进展 国内 第3页/共12页 2000年汪明等克隆和测序了肉鸡IFN -α基因并在大肠杆菌中进行了表达 ,此项研究为重组干扰素用作新型广谱抗病毒生物制剂和免疫增强剂的开发奠定了基础。 同年程坚等 克隆和鉴定了鸡 IFN γ基因 ,并构建了共表达 H9 亚型禽流感病毒血凝素基因和鸡 IFN γ基因的重组鸡痘病毒。 2001年江国托等在感染鸡新城疫病毒的细胞中获得 IFN cDNA。并成功在大肠杆菌中表达，为治疗禽病奠定基础。 2002年万建青等研究并应用猪重组干扰素γ预防和治疗病毒性疫病 ,克隆了大白猪 IFN γcDNA、 构建了毕赤酵母，经鉴定可以抵抗蓝耳病病毒(PRRSV)感染。即酵母表达的 重组猪IFN γ是有应用价值的抗病毒生物工程制剂。 干扰素基因工程研究进展 第4页/共12页 20 世纪 70 年代末，Sral 等的研究首次证明 DNA 可被动物体细胞摄入，并到达细胞核得以转录。 1 982 年，Will 等的实验进一步证明 DNA 可被高等动物的细胞摄入并表达，而揭开基因治疗的序幕 1990 年，Wolff等对肌肉直接进行质粒DNA 注射发现质粒及外原基因能被吸收并得到表达蛋白产物。 1992 年，Tang 等的实验发现外原基因枪轰击到细胞后，能引起免疫反应。 1993 年，Ulmer等实验证明核酸疫苗能够诱导产生有效的免疫保护反应 1994 年，Sekellick 等首先克隆出鸡Ⅰ型IFN，并在鼠 L（Y）细胞中表达出具有抗病毒活性的 ChIFN蛋白。 1995 年，Schultz等通过 E.coli 和 COS 细胞表达了具有较高抗病毒活性的重组 ChIFN-α， 纯化的 E.coli 表达产物是鸡 Mx 基因表达的强诱导 1997 年，Song等利用 E.coli 和COS 以及 CEC-32 细胞系分别表达了重组 ChIFN-γ， 其中COS 和 CEC-32 细胞系表达产物不仅具有抗病毒活性，还能促进巨噬细胞表面抗原Ⅰ类和Ⅱ类 MHC 的表达。 2001年，Yashiro等以 brevibacillus choshinensis 为宿主高效表达了 ChIFN-γ，产物活性与天然 ChIFN-γ 相当，其比活性比E.coli 和 P.pastoris 系统的表达产物高 3 倍。 家禽干扰素核酸疫苗的研究进展 国 外 第5页/共12页 夏春、程坚、刘胜旺、吕英姿等人采用 PCR 技术先后成功实现了丝羽乌骨鸡 IFN、 惠阳胡须鸡 IFN-α、γ 干扰素、 石岐杂鸡IFN-α、γ 干扰素、 鸭Ⅰ、 Ⅱ干扰素等基因的克隆和序列分析，并发现克隆得到的鸡 IFN-α、γ 基因的开放阅读框架ORF 分别由约 579 和 492 个核苷酸组成； 同时对禽类 IFN基因的同源性进行了分析，确定了一些新的亚型；通过序列比对发现，不同品种鸡的同类 IFN 核苷酸的同源性在 90 %以上，相应的鸭 IFN的同源性则在 70%左右。 吴志光等还对鸡 α、γ 干扰素基因成功地进行了体外重组表达、 纯化和活性测定， 这些研究