血清学诊断在结核病中的临床应用价值.ppt

. 结核抗体测定存在的问题 1. 假阳性：3%~15%。 假阳性的发生原因： 1)共同抗原所致的交叉反应； 2)隐性结核菌感染包括初染、再染、非结核分支杆菌感染、卡介苗接种、结核杆菌L型感染等，结果均可致结核抗体短期或较长时期的升高； 3)实验操作/试剂质量。 . 2. 假阴性：30%~2%。 假阴性发生的原因： 1)机体方面所致的假阴性：如某些临床确诊的活动性结核患者，而体液免疫测定结果则为阴性，其原因可能与个体的免疫功能异常有关。上述原因均可导致机体不产生或仅产生少量特异性结核抗体，以致于无法与正常人群的结核抗体水平相区分。 2)特异性免疫复合物的形成：由于活动性结核患者体内产生的特异性抗体，可与结核抗原结合，形成免疫复合物，从而导致结核抗体测定为阴性。 3)方法方面的因素所致的假阴性：如测定方法本身灵敏度不够、仪器不够灵敏和影响技术条件的各种因素均可导致假。 4)试剂质量和操作因素：试剂灵敏度偏低是造成假阴性的主要原因之一，操作人员的业务素质也是影响因素之一。 . WHO不推荐血清学检测方法 诊断活动性结核病 2011年WHO正式公告：由于目前的商业血清学试剂在结核检测中存在较大差异，且检测结果很高比例的假阳性和假阴性，因此不建议使用血清学方法作为结核杆菌的诊断实验1 。 1WHO Commercial Serodiagnostic Tests for Diagnosis of Tuberculosis. /publications/2011/9789241502054_eng.pdf 不能早期诊断！容易漏诊、误诊！ . 2012年4月16日，SFDA发布了《关于进一步加强结核病血液检测试剂监管有关事宜的通知》（食药监办械【2012】48号），要求各省、自治区、直辖市食品药品监督管理局按照通知要求对行政区域内有关结核病血液检测试剂的注册审评情况开展检查，试图通过对国内生产结核病诊断血清学制品的企业进行一次背景调查。 分析目前国内核病血清学检测试剂在生产过程质量控制和在临床评价中存在的问题及解决问题的方法。 . 我国目前结核病血清学检测试剂的情况 1.我国结核病血清学检测试剂现状 市场上销售的结核病血清学诊断试剂有近百家，经国家食品药品监督管理局批准的国产诊断制品抗体检测试剂盒29个，其中经国家级批准的26个，省级批准的1个，进口制品1个。抗原检测试剂盒3个，其中省级批准的1个。 大多数未经批准的结核病血清学诊断试剂游离于国家监管范围之外，值得引起国家有关部门及人员的关注与重视。 . 2. 结核病血清学诊断试剂生产企业背景调查情况 调查资料的内容主要包括试剂盒背景资料、试剂盒成品检测、试剂盒检测参考品制备与标化，参考品使用情况及临床研究等方面； 通过对各生产企业报送的资料进行分析，共收回调查问卷29份.我国目前结核病血清学诊断制品的品种与近3年的数量见下表. 由于无法掌握未经批准的结核病血清学诊断试剂的非法销售情况，结果并不能代表国内实际销售状况。 . 存在的问题： 1.阳性参考品的选择 多数企业在阳性参考品选择时通常只选择菌阳患者抗体强阳性血清，如果试剂某批次质量出现问题，敏感度偏低时，若阳性参考品中全部使用强阳性血清，所有阳性参考品反应均呈阳性，则无法反映该试剂的真实敏感度。如标准品中有弱阳性血清的反应可能呈阴性，提示试剂敏感度可能存在问题。因此，血清学抗体检测试剂在质量控制中需要强、中、弱三种不同效价的血清用于敏感度的质量控制。同理，在试剂制备过程出现问题，可能产生假阳性时。如果阴性参考血清都选择本底极低的样品，可能无法检出，因此阴性参考品应含有临界阴性参考血清。 . 2.参考品的标化 为获得阳性与阴性不同效价的血清，获得血清后应先进行初筛，再用不同的方法学对血清进行效价标定，确定血清的效价，从中选择不同反应强度的样本，作为阳性或阴性参考品。但多数企业未进行细致的效价标化，通常以试剂盒筛选后就作为检测参考品。 标准品的建立应有规范的操作细则，至少样品采集、检测与标化的过程中所有的实验操作均需先制定SOP，再 严 格 遵 循SOP进行操作，并有对应的原始记录。从已收到的资料来看，多数企业存在不足之处。 . 3.参考品的制备 结核病体外诊断试剂参考品通常由阳性参考品、阴性参考品、最低检出量或最低检出限参考品和精密性或重复性参考品组成，用来控制试剂盒的敏感度、特异度、检出限和精密度等。但部分试剂厂家仅有阳性与阴性检测参考品。 由于参考品用于体外诊断试剂质量控制，所以参考物质原料的选择取决于诊断试剂的预期用途。原料应与试剂盒的使用要求相一致或尽可能接近，这样可以消除方法基体效应引入的系统误差，阳性参考品应包括痰菌阴性和痰菌阳性患者的血清，但个别企业仅