集成纳米增强基底的微流控SERS芯片及其致病菌检测.docxVIP

集成纳米增强基底的微流控SERS芯片及其致病菌检测 快速、高效、准确地对致病菌进行鉴别和检测在医学诊断、食品 安全、公共卫生等多个方面都具有重要意义。以临床细菌感染为例, 严重的致病菌感染死亡率高达35%~70%,对人类健康造成极大的威胁。 目前，致病菌检测多采用传统的培养与镜检、分子生物学检测法或免 疫学检测法等：l-21o培养与镜检等传统检测方法的优势在于操作简 单，但通常需要1?3天才能得到相应的结果；分子生物学检测法如聚 合酶链式反响(Polymerase Chain Reaction, PCR)虽然缩短了检 测时间，且具有检测灵敏度高，特异性好等优点，但其操作繁琐，成 本较高，同时需要熟练的操作技能；以抗原抗体为基础的免疫学检测 法如酶联免疫分析，虽然具有特异性好、敏感性高，检测速度快，费 用低等优点，但是存在操作复杂、容易受污染、蛋白不稳定等缺点, 同时检测易受抗原、抗体相结合能力的影响，易造成假阳性。以上这 些检测方法都存在一定局限性并大大限制了其在临床快速诊断中的 广泛应用［3］。因此，开展针对微量致病菌的快速、高灵敏度、高选 择性的辨识检测新方法备受关注。 拉曼光谱是一种基于物质分子振动而获得物质指纹光谱的分析技术, 具有能带谱窄、检测所需样本少、不受水的干扰等特点［4］,是一种 良好的生化样本检测技术。但拉曼光谱的散射截面非常小，其散射光 强度约为入射光强度的10T0,导致信号极弱，因此拉曼光谱很难检 采用“原位制造”方式获得的微流控SERS芯片，是指直接在微流控 通道中进行SERS增强基底的制备，并可在固定的微纳米结构处同步 实现待测样本的SERS光谱检测，常用的制备方法有化学法和飞秒激 光技术等［46］。 我们课题组［47-49］通过自组装-化学镀法在微流控通道中原位制备 了多种SERS基底，其中制备的Au@Ag/TI02 NTs基底对罗丹明6G的 最低检出限为10-10 mol/L,增强因子为1. 15X108o Parisi等［50］ 首先通过原位电沉积Cu核/C鞘纳米墙，随后采用置换法原位合成Ag 纳米颗粒从而制备了新型纳米墙结构的微流控SERS芯片(图3 (a)) 用于结晶紫检测，检出限达5X10-11 mol/L, SESR增强因子达 1. 16X109o Wang等［51］采用化学置换方法，在微通道内制备三维 Ag枝晶(图3(b))用于阿莫西林的SERS检测，检测限到达10-3 mg/Lo Lawanstiend等［52］通过化学还原法将AgCl还原为Ag,在微通道 中原位制备了具有SERS活性的介孔Ag结构，对唾液中的硫氟酸盐的 检测限到达了 10-7 mol/Lo图3基于微通道中原位制备有序纳米基底的微流控SERS芯片［50-53］ Fig.3Microfluidic SERS chip based on in-situ preparation of ordered nano-substrate in microfluidic channel ［42-43, 45-46］ 飞秒激光技术是另一种可用于在微流控通道中原位制备三维复杂纳 米结构衬底的更新颖、强大的技术，其优点主要是可以在微流控通道 的任何位置精确而灵活地形成各种图案的纳米结构。Xu等［53］将 银盐溶液注入芯片的微通道，利用飞秒激光脉冲聚焦于所需位置，将 Ag+还原制备得到银纳米板，如图3 (c)。后来，他们课题组［54］ 用相同的方法制作了银微花阵列，如图3(d),用于原位监测4-硝基 苯酚(4-NP)还原反响，对其还原产物4-氨基苯酚(4-AP)实现了 监测。Xie等［55］利用激光热效应催化原位制备得到高度可控、灵 敏的3D Ag@ZnO纳米簇SERS增强基底，由于纳米簇完全在激光光斑 范围内生长，因此通过移动激光束可实现对三维Ag@ZnO纳米簇结构 位置的编程控制。 在微通道中原位制备SERS基底可使SERS检测模式与微流控技术实现 完美结合，使整个分析芯片具有多功能一体化和整体集成化的特性。 原位制备SERS基底的微流控SERS系统可以实现更可控、更灵活的纳 米结构基底制备，提供固定的热点，使样本的SERS信号具有更好的 稳定性和重现性，检测灵敏度也更高。并且固定的微纳米结构可进一 步修饰改性，在生化样本的检测灵敏度和选择性提升方面显示出强大 优势。但是这种SERS基底的集成模式对纳米微结构制备技术要求较 高，同时芯片的清洗难度大，难以重复利用。 3基于微流控SERS芯片的致病菌高效鉴别和检测应用进展由于致病菌生物组成复杂且光谱信息丰富，大多数生物分子拉曼散射 截面相对较小，实际样品中存在致病菌样本量低、背景干扰复杂、菌 种难辨识、菌量测试等问题［56］,使得现有的分析测试技术面临巨 大挑战。将微流控芯片分析与纳米技