南方医大癌生物学讲义03-2肿瘤病毒如何在细胞中复制（上）.docxVIP

第三章（2）肿瘤病毒如何在细胞中复制（上） “我们已经知道：最初感染的祖细胞的后代细胞，其细胞转化状态的维持需要RSV基因组的持续作用。这表示，某些或者全部的病毒遗传信息需要以某种方式保留下来，从转化的母细胞传给它的两个子代细胞，并且通过许多次细胞生长和分裂周期后，继续传给后代细胞。 考虑到病毒基因组缺少某些遗传元件，尤其是形成着丝粒的元件（这些元件是有丝分裂中染色体正确分配给子代细胞所必需的），以及病毒基因组DNA的新陈代谢与其宿主细胞非常不同。有一点尤其令人费解：病毒基因组是如何在传代的细胞中进行复制和传递的？” 肿瘤病毒的基因组 通过成为宿主细胞DNA的一部分 而留在病毒转化细胞内 ??1968年，人们发现在SV40病毒转化的小鼠细胞中，病毒DNA与染色体DNA紧密关联。利用离心技术测定DNA分子量发现，这些细胞中的SV40病毒DNA不再像小的病毒DNA基因组（约5kb)那样沉降，而与宿主细胞中的高分子量(50kb)染色体DNA共同沉降下来。这表示，在病毒转化细胞中，SV40病毒DNA插入到了细胞的染色体中。通过与宿主细胞染色体的整合，病毒DNA序列成为细胞基因组的一部分，如同细胞自身的基因一样，从母代细胞传递到后代细胞。 图3-2-1：SV40病毒DNA的整合：提取SV40病毒转化细胞的DNA分子，并用蔗糖梯度（用于防止离心管中不同液体层混合）稳定的碱性溶液离心沉降。在此情况下，高分子量的细胞 DNA（蓝色）在蔗糖梯度中沉降一定的距离（图左）。相比之下，病毒颗粒中提取的SV40病毒DNA（绿色）则沉降得比较慢，这说明它的分子量相对较小。核酸杂交结果表明：SV40病毒转化细胞中的SV40病毒DNA序列与细胞中的高分子量染色体DNA（红色）发生了共沉淀，表明SV40病毒基因组与宿主细胞的基因组有共价结合。 ???若干年后，人们在几乎所有（99.7%）的宫颈癌中都发现有整合到染色体DNA的人乳头瘤病毒(HPV) 基因组片段。引起争论的是，人们几乎从未发现完整的病毒基因组整合于肿瘤细胞基因组中，取而代之的是，在肿瘤细胞染色体DNA中，只发现了含有致癌信息的部分病毒基因组，而那些使病毒能够复制和构建后代病毒颗粒的基因组部分通常缺失或者仅以碎片的形式存在。 图3-2-2：整合的病毒基因组的形成 此外，最近发现，某些嗜淋巴细胞疱疹病毒，尤其是人类疹病毒6型（HHV-6）和鸡的马立克病病毒（MDV）, 可以将其基因组整合至其宿主细胞染色质DNA中的端粒重复序列。这使得这些病毒可以建立长期的潜伏感染：当病毒关闭主动复制时，病毒基因组无限期地保持；一段时间后，病毒基因组可以自我切除并主动复制。 逆转录病毒基因组 整合入被感染细胞的染色体中 ? ??SV40病毒、HPV病毒这样的DNA病毒将它们的基因组与宿主细胞染色体DNA整合，这个发现解决了一方面的疑问，但由此产生了另一个疑问：诸如RSV这样的RNA病毒，其基因组是单链RNA分子，显然不可能直接与被感染细胞的染色体DNA整合，那么它们是如何将其基因组在细胞系中多代地传递下去的呢？? ??20世纪60年代中后期，Temin提出假说：在感染细胞后，RSV病毒颗粒会合成RNA基因组的双链DNA拷贝，这些双链DNA被整合入宿主细胞的染色体DNA中。由此，病毒基因组的DNA（称为前病毒）就能够在细胞复制其染色体DNA时同时被复制。另外，前病毒DNA之后还可以作为细胞RNA聚合酶转录的模板，由此产生能够组装入子代病毒颗粒的RNA分子，或者行使mRNA的功能，用于合成病毒蛋白。当时普遍的观点认为信息的传递是单向的、特定的，Temin提出的逆转录假说使他登陆了科学的荒漠之地。 图3-2-3：RSV（RNA肿瘤病毒）的生命周期 1970年，Temin和David ?Baltimore同时发现RSV和相关病毒颗粒携带有逆转录酶，在逆转录酶发现后的一年中，人们在RSV感染细胞的染色体DNA中发现了前病毒DNA的存在，强有力地证明了Temin提出的观点！ 很快，人们又发现了一大类具有相似结构、复制周期中信息由RNA分子反流向DNA的病毒，称为“逆转录病毒”，逆转录病毒也依赖于将基因组整合入染色体以保证它们基因组的稳定保留和传递。 然而，RSV等逆转录病毒与SV40病毒等DNA肿瘤病毒在整合机制上有很重要的区别。逆转录病毒pol基因编码合成整合酶，这个整合酶与逆转录酶一同合成，参与调节染色体整合的过程。而DNA病毒基因组的染色体整合是非常罕见的（1/1000），这使得其基因组持续保存在最初感染细胞的后代细胞中。 图3-2-4：RSV的基因组结构：gag基因编码的蛋白质与病毒RNA一起形成病毒颗粒的核蛋白核心；pol基因编码逆转录酶和整合酶；env基因编码病毒颗粒的糖蛋白凸起；src基因编码的Src蛋白可导致细胞转