亚洲带绦虫烯醇酶基因及其蛋白质的结构与功能.docVIP

亚洲带绦虫烯醇酶基因及其蛋白质的结构与功能 正文 亚洲带绦虫烯醇酶基因及其蛋白质的结构与功能 文1：亚洲带绦虫烯醇酶基因及其蛋白质的结构与功能 Ａｂｓｔｒａｃｔ： 【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】 Ｔｏ ｇｅｔ ｔｈｅ ｍｅｓｓａｇｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｅｎｏｌａｓｅ ｆｒｏｍ Ｔａｅｎｉａ ａｓｉａｔｉｃａ（Ｔ．ａ．ＥＮＯ） ｂｙ ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ． 【Ｍｅｔｈｏｄｓ】 Ａ ｆｕｌｌ-ｌｅｎｇｔｈ ｃＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｅｎｃｏｄｉｎｇ ｅｎｏｌａｓｅ ｆｒｏｍ ｃＤＮＡ ｐｌａｓｍｉｄ ｌｉｂｒａｒｙ ｏｆ Ｔａｅｎｉａ ａｓｉａｔｉｃａ ｗａｓ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｔｏｏｌｓ ｏｆ ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｔ ｗｅｂｓ ｓｉｔｅｓ ｏｆ ＮＣＢＩ． Ｔｈｅ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｔｈｅ ｄｅｄｕｃｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｔｈｅ ｐｈｙｓｉｃｏ-ｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ， ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｓｉｔｅｓ ａｆｔｅｒ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ， ｄｏｍａｉｎｓ， ｓｕｂｃｅｌｌｕａｒ ｌｏｃａｔｉｏｎ， ｔｏｐｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ， ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ， ａｎｄ ３Ｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｗｅｒｅ ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ ｂｙ ｅｍｐｌｏｙｉｎｇ ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ｓｏｆｔｗａｒｅ ｐａｃｋａｇｅ ｓｕｐｐｌｉｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｗｅｂｓｉｔｅ ｏｆ ＥｘＰａＳｙ． 【Ｒｅｓｕｌｔｓ】 Ｔｈｅ ｆｕｌｌ ｃＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｅｎｃｏｄｉｎｇ Ｔ．ａ．ＥＮＯ ｉｎｃｌｕｄｅｓ ａ ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｏｐｅｎ ｒｅａｄｉｎｇ ｆｒａｍｅ ｏｆ １２９９ｂｐ ｗｈｉｃｈ ｅｎｃｏｄｅｄ ａ ｐｕｔａｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ ４３３ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ． Ｔｈｅ ｃｏｄｉｎｇ ｒｅｇｉｏｎ ｉｓ ２０５ ｂｐ ～ １５０３ ｂｐ． Ｔｈｅ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｈａｓ ａ ｈｉｇｈ ｉｄｅｎｔｉｔｙ ｗｉｔｈ ｅｎｏｌａｓｅ ｆｒｏｍ ｏｔｈｅｒ ｓｐｅｃｉｅｓ ｉｎ ＧｅｎＢａｎｋ． Ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｈａｓ ｏｎｅ ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ ｒｅｇｉｏｎ ａｎｄ ｓｔａｂｌｅ ｐｈｙｓｉｃｏ-ｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ． Ｔｈｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ ｏｆ Ｔ．ａ．ＥＮＯ ｉｓ ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ ｔｏ ｂｅ ４６６５３．５ｕ． Ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｈａｓ ｔｈｒｅｅ ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ ｒｅｇｉｏｎｓ． Ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｏｆ ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｓｉｓ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｔ．ａ．ＥＮＯ ａｎｄ ｅｎｏｌａｓｅ ｏｆ ｏｔｈｅｒ ｔｒｅｍａｔｏｄｅｓ ｉｓ ｃｌｏｓｅ． 【Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ】 Ｔｈｅ ｃＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｅｎｃｏｄｉｎｇ ｅｎｏｌａｓｅ ｗａｓ ｓｃｒｅｅｎｅｄ ｆｒｏｍ ｃＤＮＡ ｌｉｂｒａｒｙ ｏｆ ａｄｕｌｔ Ｔａｅｎｉａ ａｓｉａｔｉｃａ ｂｙ ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ． Ｔｈｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｔｈｅ ｇｅｎｅ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ Ｔ．ａ．ＥＮＯ ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｔａｅｎｉａ ａｓｉａｔｉｃａ； Ｅｎｏｌａｓｅ； ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ； ｆｕｎｃｔｉｏｎ；ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ 亚洲带绦虫（Ｔａｅｎｉａ ａｓｉａｔｉｃａ，Ｔ．ａ．）广泛分布于东南亚，包括我国西南地区及台湾， 韩国、泰国、印尼和菲律宾等地［１-３］。人们通过食生或半生含有亚洲带绦虫囊尾蚴的猪、或野猪的内脏， 特别是肝脏而感染，对劳动生产力和畜产品破坏极大。亚洲带绦虫成虫形态与牛带绦虫成虫相似，但其幼虫却与猪带绦虫的囊尾蚴相似。亚洲带绦虫成虫与牛带绦虫成虫的形态极为相似，人们长期以来把亚洲带绦虫误认为是牛带绦虫。上世纪８０年代以来人们对其形态学、流行分布、中间宿主及实验动物感染、遗传学进行了研究，但大部分工作仍局限在细胞水平［４］。本课题组构建了亚洲带绦虫成虫的ｃＤＮＡ质粒文库，获得了大量的Ｕｎｉｇｅｎｅ，在这些工作的基础上开展了对亚洲带绦虫基因组及蛋白质组学的研究，以期从分子水平寻求３种带绦虫的起源、演化和彼此间的亲缘关系及宿主选择性的形成等问题的答案。本文分析的烯醇酶（ｅｎｏｌａｓｅ， ＥＮＯ）是进行这方面研究中感兴趣的分子之一。 １ 材料与方法 １．１ 材 料 亚洲带绦虫成虫全长ｃＤＮＡ质粒文库， 由上海联合基因公司