生产用细胞株构建的原理及方法.pdfVIP

⽣产⽤细胞株构建的原理及⽅法 宿主细胞与重组蛋⽩⽣产 动物细胞是⽣产治疗性重组蛋⽩的强有⼒⼯具。为与⼩分⼦药物区别开来，治疗性蛋⽩、疫苗以及细胞 治疗产品统称为⽣物制品。宿主细胞的选择和改造对于提⾼产品的产量和质量来说⾄关重要。因此必须 对细胞进⾏筛选，选出具有⾼表达量和良好⽣长特性的细胞。在此我们主要讨论适⽤于⼤规模⽣产重组 蛋⽩的细胞株的筛选。 ⼯业上重组蛋⽩的制备主要有两种⽅式：瞬时转染和稳定转染。瞬时转染经常⽤于制备少量蛋⽩（多达 克级）⽤于药物开发早期的蛋⽩活性或动物实验。瞬时转染并不产⽣克隆细胞株，它只是暂时将编码外 源蛋⽩的质粒转导⼊已有的细胞株⾥⾯（⽐如HEK293或COS细胞）。随着细胞的分裂外源基因不断丢 失，蛋⽩产量较低，⼀般在1-100mg/L。近年来有报道称HEK293细胞中瞬时表达产量可达1g/L。 与瞬时转染不同，稳定细胞株是为⼯业化⽣产治疗性蛋⽩⽽构建的。稳定细胞株需要具备在不同的时 间，不同的场地以及不同的批次间⽣产相同质量产品的能⼒。在选定⽣产⽤细胞株之后，需要建⽴主细 胞库（mater cell bank ）。从主细胞库复苏后，扩增建⽴⼯作细胞库（working cell bank ），⼯作细胞库⽤ 于⽣产。细胞库通常保存在液氮中，需要维持整个产品的⽣命周期。在构建⽣产⽤细胞株的过程中，宿 主细胞和表达载体⾄关重要