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制备液相色谱技术会计学第1页/共68页高效制备液相色谱的原理： 色谱分离原理无论是分析型色谱还是制备型色谱都是相同的，那就是色谱理论。 但是在理论的遵循上，制备型有时需打折扣。 这是由于两种类型的色谱最终的目的是不同的。分析型色谱：分离度高，灵敏度高，以含量测定为目的。制备型色谱：要求纯度、产量和收益。第2页/共68页 经典的制备色谱方法与高效制备液相色谱的异同及优缺点：经典制备色谱方法：柱色谱、薄层色谱 … …相同：目的相同；某些方法原理也相同。不同：自动化程度不同，效率不同，分离复杂化合物的能力不同。第3页/共68页第4页/共68页第5页/共68页第6页/共68页经典制备色谱方法优点： 设备简单，投资小，见效快。能满足一般样品的 纯化要求。缺点： 效率低下，收率低，对于过于复杂的化合物，纯化效果不理想。高效制备液相色谱优点：效率高，收率相对较高，特别适合复杂样品、性质接近化合物的纯化。纯化效果理想。缺点：设备复杂昂贵，投资大，运行费用较高。第7页/共68页 制备液相色谱又称纯化系统，是目前高效率制备纯化合物最有力的方法，广泛应用于： 1.天然产物的分离与纯化 2.合成药物的纯化 3.合成反应中间产物或副产物的制备 4.手性药物的分离与纯化 5.药物杂质的分离制备 . . . . . .第8页/共68页重复性第9页/共68页第10页/共68页选择性要求第11页/共68页色谱柱吸附等温线正常载荷(loading)：第12页/共68页色谱柱吸附等温线超载(overloading)：第13页/共68页纯度（purity)、产量（throughput）和收益（yield）（PTY）三者的关系第14页/共68页浓度过载和体积过载浓度过载体积过载决定于流动相中的溶解度；位于吸附等温线的“制备”区域；产量由选择性决定；固定相颗粒大小影响较低。决定于进样体积；位于吸附等温线的“分析”区域；产量由柱子的直径决定；固定相颗粒需要小一些。 通常浓度过载和体积过载结合着使用。而由于产量较高的缘故，因而更喜欢使用浓度过载。第15页/共68页浓度过载和体积过载色谱示意图第16页/共68页什么时候使用浓度过载?什么时候使用体积过载? 一般情况下，由于需要有较大的throughput，所以浓度过载使用较多，但当样品浓度过稀，又没有合适的方法浓缩时或流动相溶解样品的能力较弱时，这时就应当使用体积过载。扩展计算第17页/共68页由分析型色谱如何扩展到制备型色谱？第18页/共68页扩展计算扩展计算举例第19页/共68页r1=1.5mm, r2=10.6mm, V1=0.6mL/min V2=? 计算结果：30mL/min计算结果25mg=30ml/min扩展计算举例第20页/共68页?第21页/共68页0.35mL/min流速下的色谱图（分析型）第22页/共68页经扩展计算，采用不同的柱径、进样量和流速样品的色谱图第23页/共68页上述五种色谱状态的参数：第24页/共68页在分析型色谱柱上，不同进样量的色谱图第25页/共68页在制备型色谱柱上的色谱图第26页/共68页制备液相馏分收集的三种方式1. 基于时间（Time-based）2. 基于峰（peak-based）3. 基于质量（Mass-based）基于时间（Time-based）第27页/共68页 根据馏分的保留时间及其色谱峰宽，以时间作为馏分收集器动作的指令参数。特点： 参数设置方便，样品收益高、损失少。 色谱保留时间的不稳定会影响到馏分的纯度和收益。Time-based第28页/共68页用峰的时间分割，按峰收集馏分 色谱峰重叠严重，重叠面积很大，收集到的两个馏分将明显不纯。－－－这时应考虑使用Time-based。第29页/共68页Time-based第30页/共68页基于峰（Peak-based） 根据色谱峰的正负斜率，触发馏分收集器，以色谱峰正负斜率作为馏分收集器动作的指令参数。特点： 馏分纯度高。 馏分保留时间的不稳定不会影响到馏分的纯度。 参数设置不方便（斜率参数需计算）；受色谱峰峰形改变的影响较大。 样品收益低。第31页/共68页Peak-based 利用正、负斜率按峰进行馏分收集。 正、负斜率和阈值可预先设置。 当色谱信号都超出预先设置的正斜率和阈值两个参数时，将触发峰的收集信号； 当色谱信号低于阈值或低于预先设置的负斜率时，将触发停止收集信号。 设置阈值的目的是为了消除噪声的影响。第32页/共68页第33页/共68页Peak-based实例（只收集后面这一组分）第34页/共68页基于质量（Mass-based） 根据馏分的质量作为指令参数，触发馏分收集器。特点： 馏分纯度高、且收益高； 馏分保留时间以及色谱峰峰形改变都不会影响到馏分的纯度； 参数设置方便； 需配备MS检测器，