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成体干细胞及组织工程学会计学第1页/共48页什么是成体干细胞？（somatic stem cell or adult stem cells ）指存在于分化组织中的未分化细胞，具有自我更新、构建和补充相应组织中各种类型细胞的潜能。成体干细胞存在于机体的各种组织器官中。2主要的成体干细胞：第2页/共48页造血干细胞（hematopoietic stem cell, HSC）骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cell, MSC）神经干细胞（neural stem cell, NSC）表皮干细胞（epidexmis stem cell, ESC）脐血干细胞（cord blood stem cell）肿瘤干细胞（cancer stem cell）3CSCs and stem cell niche第3页/共48页在肿瘤细胞中存在着小部分的肿瘤干细胞（cancer stem cells, CSCs），是肿瘤形成、复发、转移和耐药的决定性原因和基础。 4第4页/共48页成体干细胞来源：可能是胚胎细胞残留于机体，并在干细胞微环境的作用下保持静息状态。存留的组织需要修复，便在特定微环境下被激活并分化成所需的细胞。5成体干细胞三大特征：第5页/共48页自我更新 种系定向分化能力：具有多能分化特性，能够分化为特定组织的多种细胞类型，但分化潜能有限。在特定组织定居：大多数成体干细胞处于休眠状态（G0期），病理因素或诱导后表现再生和更新能力，替代受损细胞或死亡细胞。 6第6页/共48页胚胎干细胞与成体干细胞 胚胎干细胞——全能干细胞(totipotent stem cell)具有自我更新和分化形成任何类型细胞的能力，有形成完整个体的分化潜能。可分化成为全身200多种细胞类型，进一步形成机体的所有组织、器官。7第7页/共48页 成体干细胞——多能干细胞(pluripotent stem cell) 或单能干细胞(unipotent stem cell)多能干细胞能产生多种类型细胞的能力，但却失去了发育成完整个体的能力，发育潜能受到一定的限制。单能干细胞只能向单一方向分化，产生一种类型的细胞。8干细胞横向分化（transdifferentiation）第8页/共48页组织干细胞通过活化潜在的其他分化程序，改变了组织干细胞的特异性种系分化进程，可分化成其它组织细胞的能力 。造血干细胞向非造血组织细胞分化、神经干细胞向血液系统细胞分化 9造血干细胞（HSC）第9页/共48页胚胎期——定位于胎肝（Fetal liver, FL）成年哺乳动物——骨髓，外周血、脐带血转录因子MLL（mixed-lineage-leukemia gene），RunX1，TEL/ETV6，SCL/Tal1，LMO2对胚胎期HSC分化发育有重要调节作用。 10第10页/共48页HSC特性：多向分化潜能自我更新HSC的更新与分化：采用不对称的分裂方式：其中一个细胞仍然保持干细胞的一切生物特性，从而保持HSC数量 相对稳定，这就是干细胞自我更新。另一个则进一步增殖分化为各类血细胞、前体细胞和成熟血细胞， 释放到外周血中，执行各自任务，直至衰老死亡，这一过程是不停地进行着的11造血干细胞的分化： 第11页/共48页11造血干细胞微环境 第12页/共48页血管周围微环境、骨内膜微环境：维持干细胞“干性”13造血干细胞的分离与鉴定第13页/共48页人HSC表面标志物：CD34+、Lin-、c-kit+、sca-1+，Thy-1, IL-7Ra, Flt3, CD150。流式细胞分选技术，免疫磁珠分选。HSC的功能鉴定：致死剂量放射线照射动物，HSC移植可以重建骨髓的造血功能，长期（16周）产生多系成熟血液细胞。 14骨髓间充质干细胞 (MSC) 第14页/共48页主要从骨髓中分离，胎盘、脂肪组织、脐血和肝脏也存在MSC。人MSC 标志物：CD73+、CD90+、CD105+、 CD45-小鼠MSC标志物：Sca-1+、CD90+、CD45- 15第15页/共48页MSC的主要分离手段 全骨髓法MSC在低血清培养基中具贴壁优势特性，定期换液除去不贴壁细胞，可纯化及扩增MSC密度梯度离心法根据骨髓中各细胞成分比重的不同，分离单核细胞进行贴壁培养流式细胞仪法、免疫磁珠法流式或磁珠分选后的细胞出现增殖缓慢，成本较高、技术难度较大，限制了这些方法的广泛应用16第16页/共48页MSC的分化向成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞等多种细胞分化17第17页/共48页MSC的优点骨髓中的多向分化干细胞（骨、软骨、脂肪、肌细胞、心肌细胞、成纤维细胞、肝细胞）；容易获得；体外扩增109倍仍不失多向分化潜能；外源基因容易插入；免疫原性较弱；常见的组织工程种子细胞18第18页/共48页肝干细胞(hepatic