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低温胁迫对玉米叶片抗寒性的影响生科1301张一鸣 （东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030）摘要：由于低温可使幼苗的细胞膜脂发生改变，破坏膜结构，引起代谢紊乱，对植物造成伤害。为验证其伤害程度，本实验以九龙和利禾两种玉米幼苗为原料，以低温处理0h为对照组，4°C处理12h，24h为实验组，分别进行叶绿体色素含量测定，过氧化物酶活性测定，电导仪法测定植物细胞质膜透性实验来研究玉米叶片的抗寒性与抗冷性。结果表明低温对玉米叶片造成极大影响，主要表现在叶绿体含量的降低，植物叶片电导率先上升后下降，过氧化氢酶逐渐降低。可知低温玉米叶片受伤害程度与低温持续时间，温度密切相关。 关键词：玉米抗寒性低温胁迫叶绿体色素含量过氧化物酶活性电导仪法测细胞质膜透性前言：植物固着于某地生长，难以迁移，因此易于受到环境如冻害，冷害【1】等影响。研究低温胁迫与植物抗寒性的机理，有助于植物高产与当地生态环境的维护。据统计，地球上只有不足10%的陆地适合栽种农作物【2】，而在这10%的陆地上所产生的农作物，因冻害所导致的经济损失，每年高达数千亿美元【3】，例如仅在我国东北地区1969,1972,1976年的三次冻害每年均减产至少50亿千克【4】。对于温带园林，高寒地带移栽作物等，减免低温对植物的影响更是重中之重，特别是我省黑龙江处于高寒地区，本实验对于植物抗寒性的研究更具实际意义。 1.材料与方法1.1材料： 九龙，利禾玉米种子，由东北农业大学生命科学学院植物生理教研室提供。 1.2方法1.2.1玉米幼苗的培养分别取九龙，利禾玉米种子各300粒左右进行消毒，然后用蒸馏水将玉米种子洗净，在75%乙醇中消毒15s，浸种催芽处理12h后，用蒸馏水洗三次，洗去种子表面抑制生长的物质，然后进行沙培，将沙子平铺在培养盘上，用喷壶浇适当的完全营养液。将种子放在沙子上，种脐向上，种子间距离适当。种子上覆盖适当的沙子，约1cm厚，保证沙子湿度适当，培养条件为20C，浇以全素营养液，使生长健康。当植物长出四片真叶时进行试验，低温胁迫玉米幼苗并测定其5项生理指标。 1.2.2处理方法将每个品种的供试材料分为三组，一组于原处继续生长，一组移至4C冰柜低温胁迫处理12h，另一组移至4C冰柜进行低温胁迫处理24h，分别作为常温对照和低温处理处取材测定其生理生化指标。 1.2.3生理指标的测定1）叶绿素含量一分光光度计一乙醇法 称取剪好的新鲜玉米叶片0.2g，放入研钵中，加入少量石英砂与碳酸钙及8ml提取液，研磨成匀浆，室温静置3一5min后转到10ml离心管中，4000r/min离心5min，取上清液倒入容量瓶定容至25ml。 将提取液倒入比色杯中，以95%乙醇为空白，在波长为649nm,665nm下测定吸光度。 计算： Ca=13.95*A665-6.88*A649Cb=24.96*A665-7.32*A665CT=Ca+Cb叶绿体色素含量（mg/g）=Ct*V*N/W式中：CT色素浓度（mg/ml）V——提取液体积（ml）N——植物组织鲜重（g）w——稀释倍数2）过氧化物酶活性愈创木酚法 称取0.5g叶片，剪碎，放入研钵中，加适量磷酸缓冲液（pH5.5）研磨成匀浆，将匀浆倒入离心管，4000rpm，离心10min，取上清液，定容至10ml。 酶活性测定的反应体系包括2.9ml0.05M磷酸缓冲液；1.0ml2%H2O2；1.0ml0.05愈创木酚和0.1ml酶液。用加热煮沸5min的酶液作对照组，反应体系加入酶液后，立即于37°C水浴中保温15min，并加入2.0ml20%的三氯乙酸终止反应，在470nm波长下测吸光度。 计算： 过氧化物酶活性二（A470*VT）（0.01*W*VS*t）A470——反应时间内吸光度变化W——样品鲜重t——反应时间vt——提取酶液总体积vs——测定取用酶液体积3）植物细胞质膜透性一一电导仪法 用6—8mm打孔器打取叶圆片，每组30片，分装3只称量瓶。 每瓶各加10ml去离子水，于针筒中抽去细胞间空气，水渗入细胞间隙，叶片呈半透明状，沉入水下，室温防止1h。 将各瓶充分摇匀，用电导率仪测初电导值（s1） 将各瓶置沸水浴10min，杀死植物组织，取出称量瓶，冷却至室温，在室温下平衡10min，摇匀，测最终电导值（s2） 计算： 相对电导率（L）=（S1-S0）/（S2-S0）伤害率（%）=（L1-Lck）/（1-Lck）—蒸馏水电导率—煮沸前电导率—煮沸后电导率L1——低温处理时叶片的相对电导率Lck——对照（室温下）叶片的相对电导率2结果与分析2.1低温胁迫对叶绿素含量的影响初始数据： 初始数据九龙利禾 初始数据 九龙 利禾 叶绿素吸光值 A649 0.444 A665 1.034 A649A665 0.4391.042 0h 0.442