第十二单元移植免疫学检测.pptxVIP

第十二单元移植免疫学检测;器械 微量淋巴细胞毒反应板(泰萨奇板)、倒置荧光显微镜、 微量移液器、吸管、温箱、离心机、磁架等 。 试剂 淋巴细胞分离液(Ficoll, γ＝1、077)、T/B淋巴细胞分离磁珠及洗涤液、冻干补体、荧光染色液、供者全血2~3ml(EDTA或ACD抗凝)、受者血清2ml、阴性对照血清(可用1640培养液或PBS替代)、阳性对照血清(抗全淋 巴细胞抗体ALG/ATG)。;淋巴细胞得分离(Ficoll法): 1、 将供者全血用PBS(pH7、4)缓冲液 按1:1稀释,混匀备用; 2、 取15ml离心管一支,加入一定体积得Ficoll液,用吸取稀释后得供者全血,沿试管壁缓慢加入,使全血置于Ficoll上层。Ficoll液与稀释后得全血体积之比为1:2; 3、 1500~2000rpm/min(半径15cm水平转子)离心10min; 4、 取出离心管,吸取中间白膜层,置于另一干净离心管中; 5、 加入PBS,洗涤; 6、 2000rpm/min离心5min,倾出上清液; 7、 重复步骤5、6; 8、 PBS液调整细胞浓度为2×109/L。; 淋巴细胞毒反应(一步法) 1、 于泰萨奇板