细胞工程制药.pptxVIP

会计学细胞工程制药第1页/共195页指以细胞为研究对象，通过细胞培养获得自然界难以获得的珍贵产品的新兴生物技术。微生物、动物、植物细胞培养特性第2页/共195页动物细胞工程药物第3页/共195页适合真核表达的的药物蛋白或亚单位疫苗单克隆抗体药物筛选模型第4页/共195页第5页/共195页培养方法第6页/共195页（一）原代培养 1、组织块培养法 2、细胞单层培养法（二）传代培养（三）单细胞克隆培养动物细胞培养概述第7页/共195页动物细胞培养是指离散的动物活细胞在体外人工培养条件下生长、增殖的过程。第8页/共195页培养细胞的分类悬浮型—血液、淋巴细胞、杂交瘤细胞贴壁型：[A]上皮细胞型[B]成纤维细胞型[C]游走细胞型[D]多形细胞形（1）动物细胞贴壁生长特性（2）动物细胞接触抑制特性兼性贴壁型：动物培养细胞的优点第9页/共195页（1） 细胞经培养后形成的细胞系和细胞株，特征均一。 （2） 理化环境可控制，培养物可直接被观测。 （3） 提供大量均一的细胞供制备用。 （4） 便于进行人工筛选。 （5） 结合显微电影技术，可观察细胞代谢活动和反应。 应用：（1）生产有重要价值的蛋白质产品 分泌性的蛋白质产品（2）培养皮肤细胞用于移植 形成组织（3）检测有毒物质 致癌致畸引起染色体数目和结构改变 （4）理论研究 培养正常或异常细胞用于生理、病理、药理研究第10页/共195页（1）动物细胞贴壁生长特性（2）动物细胞接触抑制特性第11页/共195页细胞从接种到长满底物表面后，由于细胞繁殖数量增多相互接触后，不再增加。第12页/共195页动物细胞培养所需仪器设备实验室要求（A）和缓冲间相连，缓冲间内备消毒服装和鞋，口罩等，入内换上。（B）室内空气不流通，有适当的光线，清洁，干燥.万级。（C）侧部可设传递窗，用于物品传递。（D）有消毒用紫外线灯（1）培养器具（2）超净工作台（3）CO2培养箱（4）倒置显微镜（5）纯化水装置第13页/共195页（1）培养器具培养瓶培养皿培养板第14页/共195页（2）超净工作台超净工作台的工作原理是利用鼓风机驱动空气遁过高效滤器除去空气中的尘埃颗粒，使空气得到净化。100级超净工作台指标：（≥0.5цm≤3.5粒/L）第15页/共195页 （3） CO2培养箱CO2培养箱设定的条件为37 ℃ ，5％CO2 。二氧化碳的作用：细胞生长需要、维持pH值。第16页/共195页（4）倒置显微镜第17页/共195页 （5）纯化水装置培养细胞的生存环境第18页/共195页适宜的温度----人和哺乳动物培养细胞最适温度均为35－37℃。气体环境和氢离子浓度----需要一定量的O2和CO2（95％空气+5% CO2）；pH 7.2-7.4 营养物质----适当的培养基环境无毒和无菌：双抗、消毒渗透压：平衡盐溶液（BSS）第19页/共195页 功效：①维持渗透压②提供缓冲系统③提供水分和无机盐 第20页/共195页培养液要求氨基酸---氮源盐类---钠离子，钾离子，镁离子，钙离子，氯离子，硫酸根离子，磷酸根离子，碳酸氢根离子等 葡萄糖：供能 缓冲系统---CO2缓冲系统或HEPES （羟乙基哌嗪乙硫磺酸 ）生长因子---血小板源性生长因子（PDGF） ，表皮生长因子（EGF） ，成纤维细胞生长因子（FGF）以及血管内皮生长因子（VEGF）其它成分---维生素，矿物，有机补充物，激素等第21页/共195页动物细胞的培养基动物细胞的培养基组成----氨基酸、葡萄糖、蛋白质、核酸类物质、维生素、辅酶、激素、生长因子、微量元素、缓冲系统。1、天然培养基2、合成培养基3、无血清培养基第22页/共195页天然培养基天然培养基如----血清，血浆，组织浸出液等优点----营养成分丰富，培养效果好缺点----来源受限。成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析。易发生支原体污染天然培养基的类型：[A]乳蛋白水解物培养基[B]酪蛋白水解物培养基[C]血清及胚胎浸出液培养基第23页/共195页合成培养基合成培养基--是根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的。如TC199、MEM、RPMI-1640、 DMEM等。优点--标准化生产，组分和含量相对固定，成本低。缺点--缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。目前常用基本合成培养基＋血清来培养细胞合成培养基的类型：（A）Eagle培养基（内含13种氨基酸、9种维生素、多种无机盐）（B）Ham氏F10培养基（内含20种氨基酸、多种维生素、10种无机盐）（C）199培养基（D）Waymouth氏MB752/1培养基（E）NCTC10