淋巴瘤基因克隆性重排检测.pptxVIP

会计学 1 淋巴瘤基因克隆性重排检测 辅助诊断 预后分析 指导用药 MRD检测 血液肿瘤（常规肿瘤）检测方案-MICM综合分子检测(旌准方案) 第1页/共22页 Moffitt, A. B. and S. S. Dave (2017). J Clin Oncol 35(9): 955-962. 分子检测-淋巴瘤 第2页/共22页 淋巴细胞克隆性基因重排检测产品特点 第3页/共22页 B-Cell Receptors (BCR) /Immunoglobulins (Ig) T-Cell Receptor (TCR) 蛋白 基因 染色体定位 Ig重链 IGH 14q32 Ig轻链 IGK 2p12 Ig轻链 IGL 22q11 蛋白 基因 染色体定位 TCRα TRA 14q11 TCRβ TRB 7q32 TCRγ TRG 7p15 TCRδ TRD 14q11.2 淋巴细胞克隆性基因重排检测的目标分子Ig和TCR--单一基因重排，即恶性淋巴细胞 第4页/共22页 IGH, TRB TRD: V, D, and J IGK, IGL, and TRG: V and J regions 正常淋巴细胞成熟过程/良性病变 多克隆性 多种形式的基因重排 恶性淋巴瘤发生的过程 单克隆性 突出单一形式的基因重排 多样性与克隆性 第5页/共22页 鉴别诊断：明确是淋巴组织反应性还是淋巴细胞恶性增殖 辅助诊断：少见类型淋巴瘤，如肝脾T细胞淋巴瘤 亚类分析：明确是B淋巴恶性增殖还是T细胞恶性增殖 区分同一患者两种淋巴细胞恶性肿瘤，包括复发与继发淋巴瘤 微小残留病灶监测，评估治疗效果或复发风险（NGS方法） 细胞免疫治疗监测，监测回输T细胞增殖状况和淋巴组织来源肿瘤细胞清除效果（NGS） 5%～15%的病例表现复杂，即使做了大量的免疫标志也可能难以鉴别其良恶性，需要进一步的手段区分。 利用分子生物学手段分析Ig和TCR基因的克隆性重排被WHO公认为该疾病诊断手段的重要补充。 淋巴细胞克隆性基因重排检测的临床意义 第6页/共22页 基于PCR检测技术，简便、快速、成本较低，所需DNA量少，对DNA质量要求不高。灵敏度高于10%，需配制胶，安全清洁性较差。 基于PCR-毛细管电泳检测技术，敏感性高，检测周期较长，结果更加直观可靠 目前市场最被接受的检测方法。灵敏度无法满足MRD要求，难以定量和得到序列。 新兴技术，更高灵敏度（10-6），更高分辨率，更高的通量，更广泛的应用。但成本高，仪器贵，操作复杂，时间长。 （IGH, IGK,）（IGL）（TRB ,TRD,）（ TRG）BIOMED-2方案，唯一授权） IGHV（依据ERIC指南） IGH, IGK, TRB , TRG IGHV 基于不同方法的产品系列-Invivoscribe公司 第7页/共22页 Invivoscribe公司的IdentiCloneTM系列产品是基于PCR的克隆性检测产品，是BIOMED-2唯一授权的商品化试剂，获得CE认证，以其高度的灵敏性和特异性，成为可疑淋巴组织增生性疾病克隆性分析的“金标准”。 IdentiCloneTM系列产品具有精心优化的标准化试剂组成，具有最丰富的阳性对照，涵盖各种T\B细胞重排类型，经过了超过400例的临床样本验证，按照临床产品的标准进行质检和质控，反应体系稳定，结果可靠。 从Biomed-2到Invivoscribe-唯一授权 第8页/共22页 Biomed-2研究项目 第9页/共22页 Biomed-2研究项目（IGH为例） van Dongen, J. J. M., et al. (2003). Leukemia 17: 2257. 第10页/共22页 Biomed-2研究项目（IGH为例） van Dongen, J. J. M., et al. (2003). Leukemia 17: 2257. 第11页/共22页 结果分析 （单）克隆性：扩增产物电泳在预期大小范围内一或双条带（峰） 送检组织中，淋巴细胞抗原受体基因的重排方式为单一性。表明组织中存在单克隆性增生的细胞群。 多克隆性：扩增产物电泳呈弥散涂抹状(smear)或阶梯状(高斯分布） 送检组织中，淋巴细胞抗原受体基因的重排方式为多样性。表明组织中不存在单克隆性增生的细胞群。 无扩增产物：PCR扩增后电泳未见产物 送检组织中的细胞，抗原受体基因无重排（NK，非淋巴细胞）或DNA质量过差。 第12页/共22页 淋巴瘤应用基因重排检测进行辅助/鉴别诊断的方案 第13页/共22页 检测到克隆性重排未必一定发生恶性病变 某些良性增生也可呈克隆性重排，如CD8+T细胞淋巴增生性病变、良性单克隆性丙种球蛋白病、皮肤淋巴瘤样丘疹病、免疫缺陷患者严重的EB病毒