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第一讲 均相的酶促反应动力学 酶——具有催化活性的大分子生物物质，其物质组成是蛋白质。 在多数酶促反应的生产过程中，酶以游离状态参与催化反应。——均相的酶促反应，且多数是在液相中进行反应。 本章中要讨论问题 酶促反应的动力学规律； 各种抑制酶促反应的作用及其动力学规律； 影响酶促反应的因素。k+1k+2E+S ES E+Pk?11.1 酶促反应的Michaelis-Menten方程1.1.1 酶促反应的Michaelis-Menten方程 Michaelis、Menten（1913）提出了单一底物的酶反应模型，基本内容是：酶E的底物S首先形成酶—底物复合物ES，在酶—底物复合物ES的基础上反应生成产物P和酶E。反应式如下：其中：k+1，k?1，k+2——反应速度常数 E，S，ES，P——酶，底物，酶-底物复合物，产物 根据Michaelis、Menten的单一底物的酶反应模型，其假设条件为：（1）在反应过程中，限制反应速度的反应是ES到E+P这一步反应；（2）E+S到ES的反应在整个过程中始终处于动态平衡；（3）酶以酶游离状态E和酶-底物复合物ES的形式存在，酶在反应过程中总浓度不变；（4）底物浓度比酶-底物络合物浓度要大得多。 根据反应的假设条件，可以看出Michaelis、Menten所建立的酶促反应模型式建立在平衡的基础之上的，因而称之为“平衡态理论”。 根据假设（1），有单一底物的酶催化反应的反应速度： （1-1）式中：CP，CS——产物，底物的浓度 t——时间 根据假设（2）有 （1-2）即 ： （1-3） 式中：——酶—底物复合物的解离常数 根据假设（3），有：总酶量： （1-4）联立（1-1）、（1-2）、（1-3）、有 （1-5）式中： Vmax——最大的酶促反应速度。 （1-6）1.1.2 Briggs-Haldane对M-M方程的修正 1925年 Briggs和Haldane认为在酶促反应过程中，反应的中间体ES（酶-底物复合物）的浓度不随反应时间不变化，即在酶促反应过程中，反应的中间体ES的浓度处于稳定的状态，基于这一假设所得到的酶促反应的模型称之为“稳定态理论”。即 （1-7） 则 （1-8）其中 （1-9） 称作M-M常数 代入总酶量 （1-4）得 （1-10）将（1-10）式代入（1-1）式，有 （1-11）1.1.3 Michaelis-Menten方程的参数估计 对特定的酶促反应，其动力学的M-M方程中的Vmax和Km是该酶促反应的特征参数。对Vmax和Km的确定的方法有Lineweaver-Burk法 ；Hanes-Woolf法 ；Eadie-Hofstee法 ；积分法 等 （1） Lineweaver-Burk法（简称L-B法） 对M-M方程（1-11）式取倒数，得到 （1-12） （2） Hanes-Woolf法（简称H-W法） 对L-B法的（1-12）式的等式两端同乘CS ，此种方法减少了CS值过大或过小所带来的测量误差。 （1-13） （3）Eadie-Hofstee法（简称E-H法） 将M-M方程重排得到 ： （1-14） （4）积分法 用不同的酶促反应的时间t与其反应过程相对应的底物浓度之间的函数关系通过作图或回归的方法确定酶促反应动力学参数。 （1-15）CS（mmol/L）V0（mmol/ L·min）5.550.1638.330.21111.110.24113.890.27616.660.30122.220.33927.770.347例：在pH5.1、15℃下所测定的用葡萄糖淀粉酶水解麦芽糖的反应初速度V0如表所示。求这一酶促反应的动力学参数Vmax和Km 。表1-1 葡萄糖淀粉酶水解麦芽糖的反应初速度与底物浓度 解：采用Lineweaver-Burk法，对实验数据回归，有则 采用Hanes-Woolf法，对实验数据回归，有 则 采用Eadie-Hofstee法，对实验数据回归，有 则 1.1.4 酶促反应的反应级数 （1） 当CS远小于Km时 ，为一级反应 （2） 当CS远大于Km时，为零级反应。 （3） 当CS介于上述两者之间时 ，为0至1级反应1.2 有抑制作用的酶促反应动力学 1.2.1 竞争性抑制的酶促反应动力学 当反应物系中存在与底物的结构相似的物质，这一物质也可能与酶的活性部位结合，形成非活性的复合物，阻碍了酶与底物的结合，从而影响酶促反应，这种抑制作用称为竞争性抑制。 k+3E+I EIk?3k+1k+2E+S ES E+Pk?1竞争性抑制的机理为：其中：k+3，k+3—反应速度常数 I，EI—抑制剂，酶-抑制剂复合物