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PAS染色是一种常用的体外诊断化学染色方法,可以生物体细胞内结构和蛋白质与外界环境的物质及过程间的动态平衡和关系来了解、检测和表征。本文首先介绍了PAS染色的概念、历史背景以及其优缺点,然后总结概括介绍了PAS染色的染色原理、步骤以及其中的常见问题和应用,最后介绍了一些最新的PAS染色技术改良和发展的动向,为进行本领域的研究工作提供参考。PAS染色是Paschens Periodic Acid-Schiffs Reagent染色法的缩写,是一种常见的细胞定位和微观检查技术,由德国科学家Paschen于1887年提出。染色的原理是用链糖(polysaccharide)与周期性酸(periodically acid)反应,高于一定温度的热溶胶下存在的不饱和醛糖的关联反应产生水解反应,这是PAS染色的基本概念。PAS染色的优点在于:它是一种非常简单、快速且便宜的染色方法;它可以用于检测细胞的病理生理特性,即发光因子(phosphorescence factors);通过改变染色解剖标本的颜色,能够为分类观察和比较提供更丰富的细胞信息;它可以在不利影响解剖标本外观与结构的情况下,用于研究蛋白质、多肽、性状特异性以及蛋白质结合。PAS染色染色所用的药物常常仅仅包括周期性酸(periodically acid)、活性水、Schiff染料和补血红素(hematin),只需要经过混合配制即可控制,是一种非常可靠的染色技术。其步骤有:一、石蜡块的预处理和镊子的抹刀;二、组织中的脂肪和糖原结合Schiff染料,使其变色;三、周期性酸的配制,石蜡块表面的脂肪、糖原和血红蛋白反应生成深色紫红色;四、Schiff染料可以扩散作用染色,形成密集的紫红色;最后,再用补血红素蒙上,以保护蛋白反应并抑制其他的反应。在染色的过程中可能出现的一些常见问题有:组织染色效果不佳;没有Cystoid细胞环的发现;重染消色;染色后组织表面有气泡;以及染色后组织会变色等。针对这些常见问题,首先应考虑染色的组合中包含的不当原因;其次,考虑抗凝剂、碘化物、周期酸和染料悬浮体的比例问题;最后,应该加强实验顺序与步骤的控制,如染色时间过长、染色时间过长等。PAS染色应用范围很广,除上述的染色环节应用外,现在PAS染色方法通常用于有机病理学临床诊断,例如:(1)检查皮肤内的糖原和脂质的分布;(2)检查细胞病变的情况;(3)蛋白质组成的检测及其配色;(4)标定细胞类型及细胞凋亡;(5)蛋白质共价键合染色;(6)渗透压诱导性血管脆弱性;(7)在癌细胞浆液或细胞标本中用于检测特定异常蛋白。最近,随着技术的发展,以PAS染色技术为基础的治疗方法有所发展,例如:封闭式细胞研究,即研究PAS染色玻璃板中囊泡的动态形成,PAS荒谬染色技术,即利用不常用的染料或添加剂来进行染色研究,PAS数码图像处理技术,即使用计算机技术来加快和改进PAS染色技术。总之,PAS染色无特殊是一种化学染色技术,由于其简单、快速、便宜、可靠这些特点,受到了广泛应用,在有机病理学诊断中具有重要的地位和作用。同时,对PAS染色技术的改进和发展仍有很多机会和挑战,也有很多投资者和研究者正在开发和推广更多的研究工具应用于PAS染色,其开发的新成果和应用可以为广泛的细胞学应用和临床研究提供参考。
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