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动物细胞工程专题 动物细胞培养 10代细胞 细胞悬浮液 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 胰蛋白酶 剪碎 细胞贴壁 部分细胞“癌变”，遗传物质改变，无限传代 50代细胞 传代培养 剥离、分瓶 细胞株 细胞 细胞系 1、过程： 胰蛋白酶 、分瓶 原代培养 几个有关概念： 原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。 传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。 细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40~50代，这种传代细胞为细胞株。 细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。 细胞株和细胞系的区别： 细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。 1）无菌、无毒： 2）全部的营养物质： 3）适宜的温度和PH值： 4）必要的气体条件： （添加一定量的抗生素，定期更换培养液） （葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。） 保证细胞顺利的生长增殖 36.5+（-）0.5度, 7.2-7.4 O2和CO2（95%空气和5% CO2 ） 2、条件： 维持培养液的PH 3、应用： 大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体） 作为基因工程中的受体细胞 培养的动物细胞可以用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性 用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据 核移植技术和克隆动物 1. 概念：将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。 用核移植的方法得到的动物称为克隆动物 原理：动物体细胞核的全能性。 取供体细胞 取卵母细胞 供体细胞培养 培养到 MⅡ中期 卵母细胞去核 供体细胞注入去核的卵母细胞 供体核进入受体卵母细胞 重组胚胎 代孕母牛 生出与供体遗传物质基本相同的个体 2.过程： 3.克隆动物的研究意义： 1）克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白 2）改良动物品种 3）治疗人类疾病，作为供体 4）保护濒危动物 4．体细胞核移植技术存在的问题： 1）许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷。 2）成功率非常低及克隆动物食品的安全性问题。 动物细胞融合 1.过程： 动物细胞A 动物细胞B 诱导，融合 2个完整的杂交细胞AB 有丝分裂 （膜融合、质融合） （核融合） 注意： 动物细胞的融合也需要把多个两种细胞放在一起，让它们随机融合后，再从中筛选杂交细胞 2.意义： 突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。 3.应用： 成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段，特别是利用杂交瘤技术制造单克隆抗体。 植物体细胞杂交和动物细胞融合比较 比较项目 植物体细胞杂交 动物细胞融合 原理 融合前处理 诱导方法 细胞膜的流动性、 植物细胞的全能性 细胞膜的流动性、 细胞增殖 用纤维素酶、 果胶酶去壁 用胰蛋白酶 使细胞分散 物理法:离心、振动、电激 化学法：聚乙二醇 物理法:离心、振动、电激 化学法：聚乙二醇 生物法：灭活的病毒 细胞 工程 植物体细胞杂交 动物细胞融合 诱导 过程 原生质体的制备（酶解法） 原生质体融合（物、化） 杂种细胞的筛选和培养 杂种植株的诱导与鉴定 正常小鼠免疫处理 动物细胞的融合（物、化、生） 杂交瘤细胞的筛选与培养 专一抗体检验阳性细胞培养 单克隆抗体的提纯 结果 获取杂种植株 获得杂交细胞，以生产细胞产品 用途 和意 义 克服远缘杂交的不亲和障 碍，大大扩展杂交的亲本 组合范围 应用：白菜-甘蓝杂种植株 （1）制备单克隆抗体 （2）诊断、治疗、预防疾病，例如“生物导弹”治疗癌症 单克隆抗体