动物细胞培养的基本知识.pptxVIP

动物细胞培养的基本知识第1页，共70页。一、培养细胞的生长类型贴壁型细胞:附着在某一固相支持物表面才 能生长的细胞。 悬浮型细胞:不必附着于固相支持物表面，而 在悬浮状态下即可生长的细胞。 绝大多数有机体细胞属粘附型细胞， 只有少数细胞类型，如某些肿瘤细胞和白细胞可在悬浮状态下生长 兼性贴壁细胞第2页，共70页。贴壁(粘附)型细胞 粘附:是大多数有机体细胞在体内 生存和生长发育的基本存在方式含义两方面结果 基于粘附特性，使细胞与细胞之间相互结合形成组织， 有机体的绝大多数细胞必须 粘附于一固相表面 才能生存和生长。第3页，共70页。培养时：细胞被放到体外环境中以后,同样需要粘附于某一固相表面才能生存和生长，因而属于粘附型细胞。粘附(锚定或锚着)依赖型(性)细胞：唯有粘附于固相表面才能生存的细胞第4页，共70页。 类型细胞在体内、外的粘附方式存在差异 体内：粘附是全方位 ，外形具有复杂的立体特征 体外：多数情况，细胞只有一个附着平面，外形一般与体内时明显不同 按照培养细胞的主要形态，可分为几大类型 第5页，共70页。1、成纤维细胞型 胞体呈梭型或不规则三角形，中央有卵圆形核，胞质突起，生长时呈放射状。除真正的成纤维细胞外，凡由中胚层间充质起源的组织，如心肌、平滑肌、成骨细胞、血管内皮等常呈本型状态。培养中细胞的形态与成纤维类似时皆可称之为成纤维细胞。 第6页，共70页。小鼠成纤维细胞 第7页，共70页。皮肤成纤维细胞（ 100 倍） 第8页，共70页。体外培养的年轻和老的人成纤维细胞的显微形态 左边是只分裂了几代的年轻成纤维细胞，呈现薄层、细长的形态；右边是分离了50次的老的成纤维细胞，开始衰退，并很快死亡。第9页，共70页。第10页，共70页。第11页，共70页。2、上皮型细胞细胞呈扁平不规则多角形，中央有圆形核，细胞彼此紧密相连成单层膜。生长时呈膜状移动，处于膜边缘的细胞总与膜相连，很少单独行动。起源于内、外胚层的细胞如皮肤表皮及其衍生物、消化管上皮、肝胰、肺泡上皮等皆成上皮型形态。 第12页，共70页。第13页，共70页。第14页，共70页。3、游走细胞型常具有胞质突起（伪足），呈散在生长，一般不连成片，呈活跃游走或变形运动，方向不规则。此型细胞不稳定，有时难以和其他细胞相区别。 单核巨噬细胞系统的细胞第15页，共70页。4、多形细胞型细胞一般分胞体和胞突两部分，胞体为细长型，似丝状伪足。有一些细胞，如神经细胞难以确定其规律和稳定的形态，可统归于此类。 第16页，共70页。第17页，共70页。（a）成纤维细胞型；（b）上皮细胞型；（c）游走细胞型；（d）多形性细胞型第18页，共70页。细胞形态的影响因素细胞种类血清成分培养液中的添加成分酸碱度气相环境温度条件第19页，共70页。悬浮型见于少数特殊的细胞，如某些类型的癌细胞及白血病细胞。胞体圆形，不贴于支持物上，呈悬浮生长。这类细胞容易大量繁殖。第20页，共70页。培养时不贴附于底物而呈悬浮状态生长或以机械方法使保持悬浮状态下生长 来自血，脾或骨髓 在悬浮中生长良好细胞圆形，单个或小细胞团 生存空间大，提供数量大，传代方便(不需消化)，　易于收获，可获得稳定状态 观察不方便第21页，共70页。第22页，共70页。兼性贴壁细胞既能贴壁生长又能悬浮生长 CHO细胞 小鼠L929细胞 贴附时：上皮或成纤维细胞形态悬浮时：圆形第23页，共70页。 二、体外培养物的细胞生物学特点总的：与体内仍有相似-- 体外培养的细胞仍存在细胞和细胞、 细胞和基质的相互关系但有不同 相对孤立、相对单一 失去原有组织结构和细胞形态 分化减弱或不显第24页，共70页。体外培养物的细胞生物学特点 体外培养 单个细胞也能生存和增殖 但单个细胞不是细胞永久存在的形式, 培养的细胞之间仍有在形态和机能上的 相互依存关系 第25页，共70页。 相互依存关系 1.培养的细胞之间 仍有在形态和机能上的相互依存关系。 在结构上，如：上皮细胞仍见有桥粒 在生理活动上，单个细胞虽能生长繁殖, 但不如群体细胞能力强， 当相邻细胞接触，便导致运动停止 细胞相互沟通生物信息的结果 2.培养的细胞和基质之间 对细胞外基质仍有依存性 第26页，共70页。 但有不同 人工所模拟的条件与体内实际情况 仍不完全 相同 当细胞被置于体外培养后 久了,必然发生变化与体内主要不同 相对孤立、相对单一 缺乏体内的一些影响 第27页，共70页。 主要表现 失去原有组织结构和细胞形 如：肌肉细胞—纤维化 分化减弱或不显 出现类似“返祖”现象：细胞趋向单一化 或获得不死性 或变成具有恶性性状的细胞群 因此要正确认识体外培养细胞 是一种特定条件下生长的细胞群体第28页，共70页。培养细胞的主要的生物学特点培养细胞分化状态的变