选修现代生物科技专题.pptxVIP

会计学第1页/共54页(1)基因工程中三种基本工具的作用及特点(2)基因工程原理及基本操作程序(3)设计某一转基因生物的培育过程(4)基因工程的应用及取得成果的典型实例(5)蛋白质工程原理及其与基因工程的区别和联系第2页/共54页1．1、1.2　DNA重组技术的基本工具　基因工程的基本操作程序第3页/共54页一、基因工程诞生的理论基础1．基因拼接的理论基础(1)DNA是生物的主要遗传物质。(2)DNA的基本组成单位都是四种脱氧核苷酸。(3)双链DNA分子的空间结构都是规则的双螺旋结构。第4页/共54页2．外源基因在受体内表达的理论基础(1)基因是控制生物性状的独立遗传单位。(2)遗传信息的传递都遵循中心法则阐述的信息流动方向。(3)生物界共用一套遗传密码。第5页/共54页二、基因工程的操作工具1．限制性核酸内切酶能够特异性地识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并能在特定部位将两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，使其形成黏性末端或平末端。第6页/共54页2．DNA连接酶(1)常用的DNA连接酶第7页/共54页(2)DNA连接酶与DNA聚合酶的比较DNA连接酶DNA聚合酶作用实质都是催化两个脱氧核苷酸之间形成磷酸二酯键是否需模板不需要需要连接DNA链双链单链第8页/共54页DNA连接酶DNA聚合酶作用过程在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键将单个脱氧核苷酸加到已存在的核酸片段的3′端的羟基上，形成磷酸二酯键作用结果将存在的DNA片段连接成重组DNA分子合成新的DNA分子第9页/共54页3.载体(1)作用：①作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞内。②利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制。(2)种类：质粒、λ噬菌体的衍生物和动植物病毒等。(3)一般来说，天然载体往往不能满足人类的所有要求，因此人们根据不同的目的和需要，对某些天然的载体进行人工改造。第10页/共54页三、基因工程操作的基本程序1．目的基因的获取途径(1)直接分离：从自然界已有的物种中分离，如从基因文库中获取。(2)人工合成目的基因常用的方法有：①已知核苷酸序列的较小基因，直接利用DNA合成仪用化学方法合成，不需要模板。②以RNA为模板，在逆转录酶作用下人工合成。第11页/共54页(3)PCR技术与DNA复制的比较PCR技术DNA复制相同点原理DNA双链复制(碱基互补配对)原料四种游离的脱氧核苷酸条件模板、ATP、酶等第12页/共54页PCR技术DNA复制不同点解旋方式DNA在高温下变性解旋解旋酶催化场所体外复制主要在细胞核内酶热稳定的DNA聚合酶(Taq酶)细胞内含有的DNA聚合酶结果在短时间内形成大量的DNA片段形成整个DNA分子第13页/共54页2.基因表达载体的构建(1)基因表达载体的组成：启动子、目的基因、终止子以及标记基因等。(2)基因表达载体的构建方法第14页/共54页　导入的目的基因的表达需要调控序列，因此在插入目的基因的部位之前需有启动子，之后需有终止子。3．将目的基因导入受体细胞第15页/共54页生物种类植物细胞动物细胞微生物细胞常用方法农杆菌转化法显微注射技术Ca2＋处理法受体细胞体细胞受精卵原核细胞转化过程将目的基因插入到Ti质粒的T－DNA上→农杆菌→导入植物细胞→整合到受体细胞的DNA→表达将含有目的基因的表达载体提纯→取卵(受精卵)→显微注射→受精卵发育→获得具有新性状的动物Ca2＋处理细胞→感受态细胞→重组表达载体与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA分子第16页/共54页　4.目的基因的检测与鉴定(1)分子水平检测①导入检测：DNA分子杂交技术，即使用放射性同位素标记的含目的基因的DNA片段作探针检测。第17页/共54页(2)个体生物学水平鉴定：对转基因生物进行抗虫或抗病的接种实验。第18页/共54页 (2010年北京海淀区抽查)下图是含某目的基因的DNA片段，据图回答下列问题。第19页/共54页(1)根据图示可知，若用EcoRⅠ和SmaⅠ限制酶切割，则此DNA片段可有_____个限制酶切割位点，切割后共有____种____个切割末端。(2)EcoRⅠ限制酶切割后形成的末端是　　　　末端，在图中用笔标出切割部位。(3)如果要将用EcoRⅠ限制酶切割形成的目的基因片段导入受体细胞，一般需要_____作载体。其应具备的特点有：_____、___、___。(4)E·coli DNA连接酶连接目的基因和载体时连接的是图中____(填字母)部位的化学键。第20页/共54页第21页/共54页【答案】　(1)3　2　6(不计算原有的)(2)黏性(3)质粒　至少有一个切割位点　能自我复制　含标记基因(4)X第22页/共54页 (2009年江苏高考题)苏云金杆菌(Bt)能产生具有杀虫能力的毒素蛋白。下图是转Bt毒素蛋白基因植物的培育过程示意图(amp