大小鼠眼眶取血方法(附图)-课件.pptVIP

大小鼠眼眶取血方法交流（附图） 2014-5-5 交流提纲 实验环境 实验材料 动物处理 取血容量 时间安排 具体操作 . 血样处理 问题讨论 环境 材料 B 毛细管 0.9mm × 100mm，看个人习惯使用， 经常一管三断，30mm/管，弃去中间段。 EP 管 加入0.1% 肝素钠 （＞150U/mg） 0.1 mL，均匀润湿， 50℃以下干燥； 适用 1mL 全血的抗凝，效果良好。 取血时必须提前检查管的质量，标号分组，适当多备。 C 抗凝EP管 D 计时工具 A 通风台面 长时间操作，透气通风 宽敞台面，便于多组多步骤同时操作 Page  3 Page  4 动物处理 实验期间 ，补充体液 ，目前常规为：取血后灌胃给予等统计生理盐水/葡萄糖溶液。 动物 体重要求 一般 不低于250g 给药前 禁食12-24h，给药前 提前 0.5-1.0h 按 0.5-1.0%（V/W）给水 实验之后，外用消炎药涂布眼部 Page  5 容量 时间 注射 一般 呈现 降低 趋势，给药后较短时间内采集的点数适当增加； 灌胃 存在Cmax-tmax，需通过考察tmax，根据一般原则，适当调整时间间隔。 取血 容量 时间 安排 选点一般原则 预实验建立 药物性质 给药途径 分布相 3-4个点 吸收相 3-4个点 吸收相 3-4个点 一般12h内取血 不超过动物质量 2.0% （v/w） 每次0.25- 0.5 mL Page  6 大鼠眼眶取血流程 6样品摇匀 1.将大鼠按压在鼠笼上，拇+中+食指固定住头部 3.右手持毛细管从眼内眦部，与鼠面成45 ℃夹角，旋转刺入 2.紧握颈部，压迫颈两侧，使眼突出，眶后静脉丛充血 4.固定身体，压住后肢，放松手指，调整毛细管，流畅出血。 5.取血完成，立即除去颈部压力，将采血器拔出，按压止血。 6血样管轻轻混匀，防止凝血、溶血。 2压迫颈部 3旋转刺入 4固定采血 5去管止血 1左手保定 Step 1 A 建议笼子内放置重物 防止摇晃； B 一定要带手套； C 开始必须牢牢固定住头部 头部乱动，扎位置容易得偏离，且易被咬伤； D 可在此时将大鼠取血侧的胡须剪掉，防止接触凝血。 Page  7 大鼠眼眶取血流程 Step2 A 可用管试探性触碰眼球是否已经突出； B 此时大鼠反抗挣扎最厉害，保证抓紧的同时，不能太过，使其窒息死亡。 Page  8 大鼠眼眶取血流程 Step3 A 针头斜面先向眼球，刺入后再转一定角度使斜面对着眼眶后界； B 刺入深度，小鼠约2-3mm，大鼠约4-5mm。当感到有阻力时即停止推进，同时，管退出约0.1-0.5mm，边退边旋转； C 不要使用管的尖锐锋利端插入，易留玻璃碎片在眼内，造成持续伤害，使得下次反抗增加； D 拿管的手要保持干净，带血渍的手指不要接触管的两端，易造成凝血，可用醇水擦洗。 Page  9 大鼠眼眶取血流程 Step 4 A 一般血流速度快，证明插破了眼眶动脉，如果血流速度慢，证明要调整毛细管的位置，血液都流到组织中了，没顺毛细管流出来； B 出血过程中如遇到出血不畅 不用着急拔毛细管 可以调整一下毛细管的扎入位置 或深或浅的挑正一下 血会重新流出； C 如看见血液已经在毛细管中凝固 必须迅速拔除毛细管，再搽干净眼睛，重新换管扎针； D 等到出血后 将力道转移到大鼠的身体上 大鼠出现乱动的情况很大的一部分力是他的后肢使出来的 保证她的后肢无法乱蹬就能很好的保定大鼠，然后将中指和食指处解除一半的力道，可以保证血液的顺畅 Page  10 大鼠眼眶取血流程 Step 5 A 当得到所需的血量后，即除去加于颈部的压力，同时，将采血器拔出，以防止术后穿刺孔出血。 B 尽量把眼睛周围的血渍搽干净，避免结块影响下次取血。 Page  11 大鼠眼眶取血流程 大鼠眼眶取血流程 Page  12 大鼠眼眶取血流程 Page  13 大鼠眼眶取血流程 Page  14 Page  15 大鼠眼眶取血流程 Page  16 Page  17 大鼠眼眶取血流程 Page  18 大鼠眼眶取血流程 Page  19 大鼠眼眶取血流程 大鼠眼眶取血流程 Page  20 大鼠眼眶取血流程 Page  21 血样处理 血样处理 血清 不抗凝 血浆 肝素钠抗凝 A全血37℃ 水浴0.5~1h， 短时间内 （ 30 min） 低速（ 4000） 离心（10min） 离心，取上清液， 低温保存 B全血 室温静置 0.5-1h， 低温冰箱 过夜） 离心，取上清液， 低温保存 Page  2