单克隆抗体技术的应用.pdfVIP

. . 第三节 单克隆抗体技术的应用 几十年以来,人们一直尝试利用人免疫系统产生人源性单抗来制备特异性强 的人源抗体药物 ,从而治疗肿瘤、感染性疾病及自身免疫性疾病等。根据用途的 不同，单抗大体上可分为三类，即诊断用单抗、治疗用单抗、生物导弹〞用单 抗。单抗为人类疾病的防治和诊断、肿瘤体定位、靶向药物的制备、防止移植物 的排异反响、新型疫苗的研制提供了较为理想的手段。 3.1用于疾病的诊断 1、检测淋巴细胞外表分子，用于鉴别淋巴细胞。 它用于区分细胞亚群和细胞的分化阶段的淋巴细胞。例如检测CD 系列标志， 有利于了解细胞的分化和 T细胞亚群的数量和质量变化，这对多种疾病诊断具有 参考意义。细胞外表抗原的检测，将对白血病患者的疾病分期、治疗效果、预后 判断等方面有指导作用。组织相容性抗原检测是移植免疫学的重要容，应用单抗 对其进展位点检测可得到更可信的结果。 人体的淋巴细胞分为T细胞、B细胞和包括 NK细胞为代表的第三群细胞， 下分假设干亚群，各有其特异的外表标志和功能，据此建立许多相应的检测方法。 临床上各种类型的免疫缺陷症、自身免疫病以及肿瘤等均可出现不同群淋巴细胞 数量和功能的变化。因此计数外周血和组织淋巴细胞及其亚群的数目或比例， 以 及它们所显示的功能强弱，可藉此判断机体的细胞免疫水平，对临床认识疾病， 探讨其发病机制、观察病情、判断预后、考核疗效以及防治疾病等方面可提供极 为有用的信息。 检测人T细胞的特异性抗原，曾采用抗人脑、抗人胸腺细胞和抗人T细胞等 -优选 . . 抗血清，通过细胞毒试验或免疫荧光染色加以鉴定。自抗白细胞分化抗原的单克 隆抗体问世以来，上述诸多方法均被新方法取而代之。常用以鉴定和检测计数T 细胞的外表分化抗原如下表所示。 表 T胞外表主要 CD 抗原及其特异性 用单克隆抗体检测 T 细胞外表抗原的方法有两大类，一类是用标记抗体着 染，如免疫荧光法、酶免疫法、生物素－亲和素〔或链霉亲和素〕系统的 ABC 法以及免疫金银染色法；另一类是用抗体致敏的红细胞作花环试验。 两类方法各 有优缺点。以下表达有代表性的方法。 〔一〕间接免疫荧光法 本法是将别离获得的外周血单个核细胞分别与抗相应CD的单克隆抗体〔如 CD2 、CD4 、CD8 〕结合后，洗去游离的抗体，继加荧光素标记的抗小鼠 Ig 抗血 清，经温育结合后，洗去多余的标记抗体，取样制片，用荧光显微镜观察并计数 约 200 个单个核细胞，以荧光阳性细胞与计数细胞总数之比，求得相应CD 抗原 -优选 . . 阳性的 T百分率。如有条件，细胞经荧光标记抗体着染后，用流式细胞仪计数， 快速而准确，但需要较多的投资，难以普及应用。 〔二〕免疫细胞化学法 通常用酶免疫检测法，如 APAAP酶免疫桥联法。 为减少非特异性着染，可选 用生物素－链霉亲和素系统试剂作 ABC法染色。该类方法可用普通显微镜观察， 凡呈棕黄色的细胞为相应 CD抗原阳性细胞，计其占总淋巴细胞的百分率。本法 简便易行，不需特殊仪器，一般试验室均可采用。 〔三〕抗体致敏细胞花环法 用相应的 CD单克隆抗体致敏醛化的红细胞作为指示物，它与受检的细胞混 匀后，置室温片刻，继经低速离心，移放室温作短期温育或4℃过夜后，重悬取 样涂片染色镜检。凡受检细胞周围粘附有3 个或更多红细胞的判为花环形成细胞 如下列图所示，共计数 100～200 个细胞，以花环形成数与计数细胞总数之比为 相应 CD抗原阳性细胞的百分率。本法需有相应的致敏红细胞试剂，受影响的因 素较前两法多。 -优选