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会计学1液质联用仪原理及操作注意事项安捷伦 高效液相色谱质谱联用（HPLC/MS）是指高效液相色谱与质谱串联的技术，是将应用范围极广的高效液相分离方法与灵敏、专属、能够提供分子量和结构信息的质谱法结合起来的一种现代分析技术。液质联用技术简介第1页/共24页 HPLC-MS主要由HPLC仪、接口离子源（LC与MS连接装置）、质量分析器、真空系统、计算机数据处理系统组成。过程：混合样品通过液相色谱系统进样，由色谱柱分离，从色谱仪流出的被分离组分依次通过接口进入MS仪的离子源处被离子化，然后离子被聚焦于质量分析器中，根据质荷比而分离，分离后的离子信号转变为电信号，传送至数据处理系统，对样品进行定性定量分析。液质联用技术简介第2页/共24页 质谱系统的结构介绍（ESI、库伦爆炸）定量方法的开发液质联用各系统的操作注意事项质谱系统的维护 主要内容第3页/共24页 一、质谱的系统结构示意图第4页/共24页 质谱系统各部件介绍1.离子源 ：产生离子化，并将产生的离子在电场的作用下进入毛细管 3.离子光学组件：包括skimmer 1，八级杆以及Len 1和Len 2,进一步除去溶剂和中性分子，高效的离子传输组件，聚焦随机运动的离子进入四级杆。2.毛细管 ：离子导入通道，将离子源产生的离子传输进入质谱，同时隔离外部的常压与质谱内部的高真空4.四级杆MS1和MS2：质量过滤器，优化离子传输和质谱分辨率，可以选择让某些质荷比的离子一次通过或者所有离子全通过。5.碰撞池：高压碰撞池，优化裂解，六级杆设计有助于捕获碎片离子6.检测器：包括高能打拿级和电子倍增器，增强信号，高增益毛细管电压 Capillary Voltage毛细管出口电压Fragmentor碰撞能 Collision energy电子倍增电压 EMV第5页/共24页 ESI离子源的原理 ESI将溶液中的离子转变为气相离子三大步骤：1.在喷雾毛细管尖端产生带电雾滴2.通过溶剂蒸发和雾滴分裂使带电雾滴变小，这一过程反复进行，直至生成很小的带电雾滴3.由很小带电雾滴产生气相离子特点1.直角喷雾离子源设计，大大减少了未离子化的中性液滴进入质谱中，降低噪音，保证毛细管和离子光路更干净，抗污染2.反吹干燥系统，加速喷雾的溶剂挥发，减少溶剂簇和流动相的附加离子，在standby状态时，仍维持一定的干燥气温度和流量，避免空气吸入质谱真空系统，极大的减少了污染第6页/共24页 库伦爆炸原理：带有被测物质离子的流动相在雾化针尖端发生雾化，液滴表面富集带同种电荷的离子，内部带相反电荷聚集，形成带电液滴细的喷雾，在电场的作用下，飞向毛细管。加热的氮气干燥气体反向流动，带走液滴中的中性溶剂分子，从而收缩液滴，直至排斥的静电力超过液滴表面张力，引起库伦爆炸，过程不断重复，待分析物离子最终变成气态进入毛细管。第7页/共24页 1.全扫描scan,确认得到化合物离子质量数2.选择离子模式，优化毛细管出口电压(fragmentor),保证母离子的传输效率3.子离子扫描，使用优化好的fragmentor,选择定量离子，优化碰撞能量，优化子离子的响应4多重反应监测MRM定量，使用已优化好的fragmentor,优化每个子离子的碰撞能MS2 ScanMS2 SIMProduct Ion ScanMRM二、定量方法的开发逻辑顺序：第8页/共24页 1.MS2 Scan 确定待测物的分子离子第9页/共24页 2.MS2 SIM 优化待测物的fragmentor第10页/共24页 3. Product Ion Scan 确定定性定量离子第11页/共24页 4. MRM 优化子离子碰撞能第12页/共24页 过膜处理流动相以及样品必须过膜（有机滤膜、水系膜）流动相应超声脱气10~20min,否则压力易波动（装有在线脱气机，影响会小一些）流动相每两天至少更换缓冲盐的使用反相常用流动相为甲醇、乙腈、水以及缓冲盐溶液。注意：LC中常采用无机缓冲盐，LC/MS中则应该使用挥发性的缓冲盐，如甲酸铵、乙酸铵；或挥发性酸碱甲酸、乙酸、氨水等调节pH三、液质操作系统的注意事项不能使用的溶剂添加剂LC/MS中不能使用磷酸盐、硼酸盐、硫酸盐、三氟乙酸、三乙胺，易残留，会形成强离子对，产生离子抑制，降低灵敏度溶剂截止波长溶剂的截止波长：乙腈/190nm,甲醇/210nm,水/190nm.一般分析时样品检测波长应至少大于所用溶剂的截止波长20nm以上，否则背景较高。1234流动相第13页/共24页 色谱柱根据键合相的不同可分为氨基柱、C8、C18、C30柱等等色谱柱使用完要冲洗，特别是使用缓冲盐分析样品时，原则上