医学微生物学课件-口腔微生物分子生物学.pptVIP

基因表达调节的方式 调节蛋白的作用 — 负向调节 — 正向调节 负向调节 乳糖操纵子学说 正向调节 原核生物基因表达的调节 主要在转录水平 真核基因生物调节 多层次 复杂性 分子克隆技术 限制性内切酶 特定的识别序列，4~6个碱基对 在识别序列内固定位置切割，5’ –端磷酸基因， 3’-端羟基基团 切割后形成粘性或平滑末端 DNA连接酶 催化DNA中相邻3’羟基和5’ 磷酸基团之间形成3’ ，5’ –磷酸二酯键。 质 粒 细胞内独立于染色体外的环状DNA，能自我复制 其上基因可借助宿主细胞的转录、翻译系统得以表达 分子2000~50000bp T pGEM?-T Vector (3003bp) Ampr lacZ ori XmnI 1994 ScaI 1875 NaeI 2695 ApaI AatII SphI BstZI NcoI SacII T7 SpeI NotI BstZI PstI SaLI NdeI SacI BstXI NsiI SP6 T 1 start 14 20 26 31 37 46 55 62 62 73 75 82 94 103 112 126 pGEM-T vector map XhoI SmaI XhoI SmaI XhoI SmaI pCI pCIA-P pGEM-T/A-P A-P fragment Sub-cloning construction of recombinant pCIA-P insertion of A-P DNA fragment into plasmid pCI XhoI SmaI T4 Ligase A-P fragment 构建质粒的特点 Ori区：复制起点 Par区：保证质粒均匀分布于子细胞 多克隆区：人为构建，便于克隆操作 选择因子：含特定基因，如耐抗生素基因，使克隆后便于挑选 接 合 在适当的条件下，雄性菌和雌性菌混合时形成配对的雄性-雌性菌，并有遗传物质的单向转移。 雄性菌：含F性因子，染色体外环状DNA 转 化 外源DNA能进入细胞内并通过整合至宿主DNA中或独立复制保存于宿主细胞内。 转 录 利用噬菌体为媒介，将供体DNA转移到受体菌内的现象，能在自然状态下发生。 分子克隆常用技术 DNA电泳 基因转移 核酸杂交 聚合酶链反应PCR DNA电泳 可分离不同分子量的DNA Ladder 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 Ladder 对临床菌株的第二次PCR 扩增产物电泳图谱分析 Lane 1~7: 临床菌株S. sobrinus; Lane 8~14:临床菌株 S.mutans. (Kb) 2.0 1.0 0.25 0.1 0.75 0.5 MW 核酸杂交 原理： 在一定条件下（温度、pH值等）DNA双股螺旋可解开并分离 在一定条件下，两股游离的互补的核苷酸可自行配对形成双股 Southern Blot 电泳、转移、杂交 确定分子量 斑点杂交 目标序列的存在 目标序列的量 聚合酶链反应PCR * * 口腔微生物分子生物学 什么是遗传物质？ 蛋白质 20种氨基酸 DNA 四种碱基 转化实验的结果说明…… 生命的主要遗传物质 脱氧核糖核酸（DNA） DNA结构的推衍 Chargaff: T+C=A+G A=T G=C X线衍射： DNA在两条链组成，相互平行 核酸的组成 DNA RNA 脱氧核糖 核糖 腺嘌吟 胞嘧啶 腺嘌呤 胞嘧啶 鸟嘌呤 胸腺嘧啶 鸟嘌呤 尿嘧啶 双链 单链 DNA复制 半保留复制 DNA复制 半不连接复制 由于DNA多聚酶只能从5’ → 3’方向合成DNA，因而半保留复制不能完全解释。 DNA复制的特点 新合成的子代DNA与亲代DNA完全一样，保证了遗传的稳定性。 RNA 信使RNA（mRNA) 核蛋白体RNA（rRNA) 转运RNA（tRNA) RNA的生物合成——转录 以DNA为模板合与RNA 由RNA多聚酶合成 从DNA上特定起始序列（启动子）开始，至终止信号结束 蛋白质的生物合成——翻译 遗传密码 由3个连续的核苷酸组成 蛋白质的生物合成——翻译 蛋白质合成过程 Ⅰ.氨基酸活化 Ⅱ.蛋白质合成的起始 AUG→甲酰化甲硫氨酸（fMet) Ⅲ.蛋白质合成的终止 终止码UAA、UGA、UAG 蛋白质的生物合成——翻译 新生多肽的加工 Ⅰ. fMet水解 Ⅱ. 磷酸