土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(上课).pptxVIP

课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数第一页，共五十页。专题2微生物的培养与应用脲酶+ CO2CO(NH2)2NH3+ H2O一、课题背景1、尿素的利用 尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。2、细菌利用尿素的原因 土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶第二页，共五十页。3、常见的分解尿素的微生物芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，某些真菌和放线菌。4、课题目的①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌一.研究思路㈠.筛选菌株㈡.统计菌落数目㈢.设置对照第三页，共五十页。 1、实例：DNA多聚酶链式反应是一种在体外将少量DNA大量复制的技术，此项技术要求使用耐高温（930C）的DNA聚合酶。原因：因为热泉温度70～800C，淘汰了绝大多 数微生物只有Taq细菌被筛选出来。启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的 要求，到相应的环境中去寻找。第四页，共五十页。2、实验室中微生物的筛选原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。 要分离一种微生物，必须根据该微生物的特点，包括营养、生理、生长条件等；方法：⑴抑制大多数微生物不能生长⑵造成有利于该菌生长的环境结果：培养一定时间后，该菌数量上升，再通过平板稀释等方法对它进行纯化培养分离。第五页，共五十页。KH2PO41.4gNaH2PO42.1gMgSO4`7H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素1.0g琼脂15.0g3、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基：①从物理性质看此培养基属于哪类？固体培养基第六页，共五十页。②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素具有〖思考2〗该培养基对微生物 （具有，不具有）选择作用。如果具有，其选择机制是 。只有能够以尿素作为氮源的微生物才能在该培养基上生长第七页，共五十页。4、培养基选择分解尿素的微生物的原理 培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。第八页，共五十页。（二）.统计菌落数目：1、显微镜直接计数： 利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。缺点 不能区分死菌与活菌； 不适于对运动细菌的计数； 需要相对高的细菌浓度； 个体小的细菌在显微镜下难以观察；第九页，共五十页。【补充】显微镜直接计数是测定微生物的方法。红细胞细菌数目细菌 红细胞数目（比例计数法） 将含已知数目的红细胞液体与待测的菌液按1：1均匀混合，在显微镜下数出各自的数目，然后求菌液中的细胞数目。等量的已知含量的红细胞 待测样品混匀涂抹测定：计算单位体积内的细菌数目第十页，共五十页。M ×Y(个)X＝N×W公 式 观察到的红细胞平均数/观察到的细菌平均数＝红细胞含量/细菌含量 　举例：已知红细胞浓度为M个/mL，从体积为N mL的大肠杆菌培养液中取出大杆菌液与红细胞液等量均匀混合后，涂片，染色，镜检。在同一视野中发出有红细胞W个，大肠杆菌Y个，求NmL大肠杆培养液中大肠杆菌的个数X是多少？第十一页，共五十页。2.间接计数法（活菌计数法） ⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。 ⑵常用方法：稀释涂布平板法。每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。第十二页，共五十页。注意事项①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30——300的平板上进行计数。②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。④恰当的稀释度是成功地统计菌落数目的关键，一般以三个稀释度中的第二个稀释度所出现的平均菌落数在50个左右为最好。第十三页，共五十页。教材P22如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数？统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计3个平板，计算出平板菌落数的平均值，然后按课本旁栏的公式进行计算第十四页，共五十页。直接计数法、平板计数法、比浊法、膜过滤法计数法第十五页，共五十页。实例分析P22 你认为哪个同学的结果更接近真实值？ 你认为这两位同学的实验需要改进吗？如果需要，如何改进？第十六页，共五十页。实例分析P22 第一同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。 第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了三个平板，但是其中1个平板的计数结果与2个相差