第7章 酶的固定化及其应用.pptxVIP

第一节 酶的固定化方法 一、常用的固定化方法 二、高新技术在酶固定化中的应用 三、固定化方法的评价第二节 固定化酶的表征 一、固定化酶的形貌表征 二、固定化酶化学基团的表征 三、固定化酶蛋白质二级结构的表征 四、固定化酶融化曲线的表征第三节 固定化酶的性质及评价指标一、固定化酶的酶学性质二、固定化酶的评价指标第四节 固定化酶在食品工业中的应用及展望一、固定化酶在食品工业中的应用二、固定化酶在食品工业中的发展展望第七章 酶的固定化及其应用 第七章 酶的固定化及其应用内容提要： 本章主要介绍了酶的固定化方法、固定化酶的表征、性质及评价指标以及固定化酶在食品工业中的应用。。教学目标： 1.掌握酶的常用固定化方法及各自方法的优缺点。 2.掌握固定化酶表征常用的技术手段及其基本原理。 3.掌握固定化酶的基本性质及其评价指标。 4.了解固定化酶在食品工业中的应用。重要概念及名词： 固定化酶、可逆固定化、不可逆固定化、吸附固定化、共价固定化、固定化酶的稳定性 引言固定化酶(immobilized enzyme)，就是通过模拟体内酶的作用方式（体内酶多与膜类物质相结合并进行特有的催化反应），通过化学或物理的手段，用载体将酶束缚或限制在一定的区域内，使酶分子在此区域发挥特有及活跃的催化功效。固定化酶的稳定性及对外界环境变化的耐受性更强，并可回收及长时间重复使用。 酶的固定化作为生物、化学、材料、环境和能源等多学科的交叉点之一，仍是酶学研究中一个活跃的领域。 第一节 酶的固定化方法酶可以以不同的方式与载体接触，从可逆的物理吸附和离子作用力连接到稳定的共价结合。按照固定化方法的不同，可以把酶的固定化分为两大类：可逆固定化和不可逆固定化。可逆固定化方法包括吸附法和通过二硫键连接酶与载体的固定化方法，不可逆固定化方法包括共价结合、包埋法和交联法。图7.1 酶的固定化方法分类 一、常用的固定化方法（一）可逆固定化方法酶与载体的结合方式较温和，可以在温和的条件下从载体上分离。1.吸附法通过氢键、范德华力、静电作用力及疏水作用力等物理作用力将酶蛋白吸附在载体的表面。操作简单、成本低廉、固定化条件温和且酶活力保留高等优点。根据酶与载体之间的相互作用力的不同，可以将吸附法分为：（4）亲和吸附（5）螯合或金属吸附（1）物理吸附（2）离子吸附（3）疏水吸附 一、常用的固定化方法（一）可逆固定化方法1.吸附法（1）物理吸附酶与载体通过氢键、范德华力或疏水作用力相结合一种温和且简便的操作过程，条件温和，不会引起酶分子的变性失活很好的经济性使用过程中存在酶分子脱落的问题（2）离子吸附（3）疏水吸附（4）亲和吸附（5）螯合或金属吸附 一、常用的固定化方法（一）可逆固定化方法1.吸附法（1）物理吸附（2）离子吸附上述物理吸附的基础上加上正、负电荷的静电作用力来实现酶的固定化。离子吸附法制备固定化酶条件温和、酶活力损失少。但当固定化的pH值和反应条件改变时，酶很容易从载体上脱落下来。（3）疏水吸附（4）亲和吸附（5）螯合或金属吸附 一、常用的固定化方法（一）可逆固定化方法1.吸附法（1）物理吸附（2）离子吸附（3）疏水吸附载体上的疏水基团与酶分子的疏水区域相互作用而实现酶的固定化。熵驱动的相互作用。不只是单纯的疏水作用力，还有酶与载体之间的范德华力。在疏水性载体表面添加疏水性基团的方法，来增加酶与载体之间的吸附面积。载体表面的疏水性能够打开脂肪酶的“盖子”结构，有利于其在接下来催化反应中表现出较高的活性。（4）亲和吸附（5）螯合或金属吸附疏水性脂肪酶的固定利用ECR1030树脂作为载体固定化CALB得到的固定化酶产品CalBimmo Plus图7.2十八烷活化树脂吸附游离酶制备固定化酶图7.3疏水载体对脂肪酶的固定化 一、常用的固定化方法（一）可逆固定化方法1.吸附法（1）物理吸附（2）离子吸附（3）疏水吸附（4）亲和吸附属于酶的定向固定化。酶蛋白与载体有序结合，使底物和酶活性中心充分接触，提高固定化酶催化效率。利用载体基质上的配体分子特异性地识别目标酶分子的结构，实现高选择性结合。配体分子价格昂贵，成本高。（5）螯合或金属吸附 一、常用的固定化方法（一）可逆固定化方法1.吸附法（1）物理吸附（2）离子吸附（3）疏水吸附（4）亲和吸附（5）螯合或金属吸附位于有机载体表面的过渡金属盐与酶蛋白的亲核基团结合，实现酶固定化。简单且得到的固定化酶比活力相对较高。固定化酶的操作稳定性不好，不易重复使用。 一、常用的固定化方法（一）可逆固定化方法2.基于二硫键连接酶与载体的固定化方法定向固定化方法的一种。通过点突变技术引入半胱氨酸，形成二硫键来实现酶与载体的定向结合。载体与酶之间形成了稳定的共价键，酶活力回收率一般都很高。酶蛋白在