植物组织培养学(有图片).pptxVIP

《植物组织培养学》实验宜春学院生命科学与资源环境学院 园林教研室 杨育红园艺教研室 卢其能 却志群第一页，共四十三页。实验一 植物组织培养实验室参观一、目的要求通过本次实验，使学生掌握如何组建植物组织培养实验室；同时熟悉组培中涉及的各种仪器设备和器皿用具的使用方法。第二页，共四十三页。二、仪器用具 组培室内的各种实验设备。三、实验内容1．介绍合理的组培室布局2．介绍实验设备和用具3．介绍实验的操作规程。四、作业将本此实训内容整理成实验报告。每人设计一个植物组织培养室的组建方案。（说明设计思路）第三页，共四十三页。超净工作台 第四页，共四十三页。第五页，共四十三页。第六页，共四十三页。第七页，共四十三页。实验二 MS培养基母液的配制与保存一、目的要求 通过MS培养基的母液配制和保存,掌握配制和保存培养基母液的基本技能.第八页，共四十三页。二、材料与用具1 所需仪器及设备：天平、烧杯、定容瓶、量筒、蒸馏水、母液瓶、标签、冰箱等。2 所需药品及试剂：配制MS培养基所需的药品、生长调节物质、蒸馏水、95%酒精、0.1mol/l的NaOH、0.1mol/l的HCl第九页，共四十三页。三、方法步骤1．母液的配制根据MS培养基配方表配制六种母液。（详见附表）2．母液的保存（1）装瓶：将配制好的母液分别倒入瓶中，瓶上贴好标签，注明培养基名称、母液号、吸取量与配制日期。（2）储藏：将母液瓶储放在冰箱内备用。四、作业1．整理实验报告。2．列一张配制MS培养基母液成分表。第十页，共四十三页。配制MS培养基母液成分表母液种类成分规定量（mg/l）扩大倍数称取量（g）母液定容体积（ml）配1L MS培养基吸取量（ml）大量元素母液1NH4NO316505082.5100020KNO3190095.0MgSO4.7H2O37018.52Cacl2.2H20500103KH2P550010微量元素5H3BO36.2500nSO4.4H2O22.31.115ZnSO4.7H2O8.60.43KI0.830.0415Na2MoO4.2H2O0.250.0125CuSO4.5H2O0.0250.00125Cocl2.6H2O0.0250.00125铁盐4Na2-EDTA37.31001eSO4.7H2O27.81.390有机成分6肌醇1002005.02505甘氨酸20.1烟酸0.50.025VB60.50.025VB10.10.025第十一页，共四十三页。实验三 MS固体培养基的配制一 目的要求 通过 MS固体培养基的配制，掌握配制培养基的基本技能。第十二页，共四十三页。二 材料与用具1 所需仪器及设备：电炉、酸度计、高压湿热灭菌器2 所需药品及试剂：配制MS培养基的各种母液、生长调节物质母液、 0.1mol/l NaOH、0.1mol/l Hcl 、琼脂、蔗糖、蒸馏水3 其他材料：移液管、量筒、定容瓶、培养瓶、标签、铅笔。第十三页，共四十三页。三 方法步骤 1．按母液顺序和规定量，用吸管提取母液，放入盛有一定量蒸馏水的量筒母液一 20ml 母液二 10ml 母液三 10ml母液四 10ml 母液五 20ml 母液六 5ml 2．加入生长调节物质： 适配制的培养基而定。 3．加入蔗糖：30g/l 4．加蒸馏水定容后倒入锅中 5．加入琼脂：6.5g/l（视琼脂质量而定）,后调节PH值(用1mol/l的NaOH或1mol/l的HCL) 6.熔化琼脂: 在电炉上加热溶液,并不断搅拌,使琼脂熔化. 7.培养基的分装第十四页，共四十三页。四、作业1．整理实验报告注：（1）配制培养基时母液吸取量的计算：吸取量（ml）=（培养基中某成分的规定浓度（mg/l）*配制培养基的体积（l））/母液中某成分浓度（mg/l）（2）植物激素母液吸取量计算：吸取母液量（ml）=（培养基中激素浓度（mg/l）*配制培养基体积（l））/激素母液浓度（mg/ml）第十五页，共四十三页。实验四 愈伤组织的诱导 一、目的要求 本次试验，首先通过在无菌操作台上进行无菌操作训练，使学生初步掌握组织培养的无菌操作技术。其次，通过本次实验是了解并掌握愈伤组织诱导的基本程序和方法。第十六页，共四十三页。第十七页，共四十三页。第十八页，共四十三页。二 材料与用具1 所需仪器及工具：超净工作台、70%酒精、95%酒精、接种器械（主要指剪刀、镊子等）、培养材料或外植体、0.1%的升汞、无菌水等。2 愈伤组织诱导培养基： MS+2.4-D1.0+KT0.2 或B5+2.4-D1.0+KT0.2第十九页，共四十三页。三、方法步骤1．进入实验室后