修饰动物模型建立与应用.pptVIP

修饰动物模型建立与应用;第 一 节分子杂交与印迹技术Molecular Hybridization Blotting Technology;核酸分子杂交 (nucleic acid hybridization ) ;复性;核酸分子杂交的原理 ;核酸分子杂交的杂交动力学;（一）印迹技术 （二）探针技术; 探针的来源;二、印迹技术的类别及应用; 其他 斑点印迹 (dot blotting) 原位杂交 (in situ hybridization) DNA点阵 (DNA array) DNA芯片技术 (DNA chip); 核酸杂交技术; Southern Blot 操作步骤：;斑点印迹杂交(Dot blot);原位杂交 （In Situ hybridization）;Western Blot 原理; 操作过程; Hours 0 4 8 16 ? ;注意的问题;三种印迹技术的比较;分子杂交实验;放射自显影照片;;Assay Formats;DNA micrarray robot enclosed in a temperature and humidity controlled environment. ;;Research Use——From Sequence to function;;DNA点阵;DNA芯片技术的主要应用;第 二 节 聚 合 酶 链 反 应Polymerase Chain Reaction; ; 耐热的DNA聚合酶 Taq DNA聚合酶于1988年saiki从嗜热水生菌thermus aquatics YT-1株中直接分离出来。该菌株于1969年从美国黄石国家森林公园火山温泉中分离到。基因全长2,499bp，编码分子量为94 kd、长度为832个氨基酸的蛋白质。 ;聚合酶链式反应(PCR)原理 PCR是Kary Mullis于1985年发明的一种模拟天然DNA复制过程,即利用DNA 聚合酶（如Taq DNA聚合酶）等在体外条件下，催化一对引物间的特异DNA片段合成的基因体外扩增技术。;5?;Cycle 3;模板DNA 特异性引物 耐热DNA聚合酶 dNTPs Mg2+ ;三、PCR的基本反应步骤; PCR thermal cyclers; ;? ;;;（一）目的基因的克隆 （二）基因的体外突变 （三）DNA和RNA的微量分析 （四）DNA序列测定 （五）基因突变分析;三、几种重要的PCR衍生技术; 原位PCR(In-situ PCR) 原位PCR是指直接用细胞涂片或石蜡片包埋组织切片在单个细胞中进行PCR扩增，然后用特异探针进行原位杂交检测含该特异序列的细胞的一种方法。 ;实时PCR技术原理;第 三 节 核 酸 序 列 分 析Nucleic Acid Sequence Analysis;核酸序列分析的基本原理;一、化学裂解法(Maxam-Gillbert法);二、DNA链末端合成终止法;;三、DNA自动测序 ;DNA自动测序结果举例;基 因 文 库Gene Library;基因组DNA文库 (genomic DNA library) cDNA文库 (cDNA library) ;基因组DNA文库;疾病相关基因的克隆与鉴定Cloning and Identification of Disease Relative Genes;克隆疾病相关基因的策略;定义 从对一种致病基因的功能的了解出发，克隆该致病基因。;克隆方式 ① 利用特异性抗体筛选表达型cDNA文库； ② 根据已知的部分氨基酸序列合成寡核苷酸作探针，筛选cDNA文库。;（二）定位克隆;（三）非定位候选基因克隆策略;（四）定位候选基因克隆策略;第 六 节遗传修饰动物模型的建立及应用;转基因技术 采用基因转移技术使目的基因整合入受精卵细胞或胚胎干细胞，然后将细胞导入动物子宫，使之发育成个体。 ;;核转移技术 即动物整体克隆技术，将动物体细胞核全部导入另一个体的去胞核的受精卵内，使之发育成个体，即克隆(clone)。;基因剔除技术 也称基因靶向(gene targeting)灭活，有目的去除动物体内某种基因的技术。;四、基因转移和基因剔除技术在医学中的应用;第 七 节??? ????? 生 物 芯 片 技 术;DNA芯片(DNA chip) cDNA芯片(cDNA chip) ;;是将高度密集排列的蛋白分子作为探针点阵固定在固相支持物上，当与待测蛋白样品反应时，可捕获样品中的靶蛋白，再经检测系统对靶蛋白进行定性和定量分析的一种技术。;第 八 节 蛋白质相互作用研