葡萄糖注射液的细菌内毒素检查 （药品生物检定技术课件）.ppt

A、B、C、D组（8管）加样结束后，用封口膜封口，轻轻振动混匀，避免产生气泡，放入37℃±1℃恒温器中，保温60±2分钟，观察并记录结果。 结果判断： 当阴性对照溶液D的平行管均为阴性，供试品阳性对照溶液B的平行管均为阳性，阳性对照溶液C的平行管均为阳性，试验有效。 若溶液A的两个平行管均为阴性，判定供试品符合规定；若溶液A的两个平行管均为阳性，判定供试品不符合规定。若溶液A的两个平行管中的一管为阳性，另一管为阴性，需进行复试。复试时，溶液A需做4支平行管，若所有平行管均为阴性，判定供试品符合规定；否则判定供试品不符合规定。 阳性对照结果出现阴性，可能是由于内毒素工作品效价标示不准确或效价衰退或失败、稀释内毒素没有使用旋涡混合器或稀释操作不当、鲎试剂效价标示不准确或效价衰退或失效、反应试管放入水浴保温前试管中内容物没有摇匀等造成。 阴性对照出现阳性结果可能是由于鲎试剂或者水污染、试验器具污染、试验过程操作不当污染造成。 热原及细菌内毒素检查在保证注射用药品使用安全方面发挥着重要的作用。 实训 5%葡萄糖注射液的细菌内毒素检查 试验原理 利用鲎试剂与微量内毒素产生凝集反应的现象，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。 试验试剂与器具 鲎试剂（λ=0.25EU/ml） 细菌内毒素工作标准品 （CRE，10EU） 细菌内毒素检查用水（BET） 5%葡萄糖注射液 旋涡混合器 恒温水浴器（37℃±1℃） 精密移液枪 无热原吸头（100μL、 1mL） 安瓿架 封口膜 脱脂棉和无菌纱布 标签纸和记号笔 剪刀 表 试验方法 凝胶限度试验（简单、经济、应用广泛，《中国药典》的“仲裁”方法） 内毒素限值确定 根据2010版《中国药典》二部“葡萄糖注射液”检查项下“细菌内毒素”的规定，其限值（L）为0.5EU/ml。 最大稀释倍数确定 已知：L为0.5EU/ml，c为1.0ml/ml，鲎试 剂灵敏度λ=0.25EU/ml。 MVD=cL/λ=0.5/0.25=2 供试品细菌内毒素的检查 按下表制备溶液A、B、C和D。 编号 内毒素浓度/配制内毒素的溶液 平行管数 A 无/供试品溶液 2 供试品溶液 B 2λ/供试品溶液 2 供试品阳性对照 C 2λ/检查用水 2 阳性对照 D 无/检查用水 2 阴性对照 （1）供试品溶液（A）的配制 用BET水将供试品稀释2倍，配成相应浓度的供试品溶液。 （2）阳性对照液（C）的配制 用BET水将CRE制成 2λ浓度的内毒素溶液。 0.3ml 2.7mlW 1.0ml 1.0mlW （3）供试品阳性对照液（B）的制备 供试品（S）的稀释 CRE的稀释 供试品阳性对照液（B） 0.3ml 2.7mlW 1.0ml 1.0mlW 1.0ml 1.0mlW 1.0ml 1.0mlS1 取8只鲎试剂，分别加0.1mLBET复溶，在分别加入A、B、C、D组溶液各0.1mL （每组2管） 。加样结束后，用封口膜封口，轻轻振动混匀，避免产生气泡，放入37℃±1℃恒温器中，保温60±2分钟，观察并记录结果。 结果判断 当阳性对照和供试品阳性对照都为阳性，且阴性对照都为阴性时，试验方有效。 若供试品2管均为阴性，认为该供试品符合规定；如供试品2管均为均为阳性，应认为不符合规定；如2管中1管阳性，1管阴性，则另取4支供试品管复试，4管中如有1管为阳性，即认为不符合规定。 若第一次试验时供试品的稀释倍数小于MVD而结果出现2管均为阳性或2管中1管为阳性时，按同样方法复试，复试时要求将稀释至MVD。 试验报告 供试品 供试品阳性对照 阳性对照 阴性对照 1号 2号 1号 2号 1号 2号 1号 2号 结果是否有效 结果判断 思考题 （1）试验设置阳性对照、阴性对照的意义是什么？ （2）试验中如果出现阴性对照为阳性，该如何处理？ （3）供试品阳性对照液如何配制？ （4）凝胶法细菌内毒素检查应注意哪些事项？ 一、基本概念 （1）鲎试剂灵敏度（λ）：在细菌内毒素检查的规定条件下使鲎试剂产生凝集的内毒素的最低浓度，用EU/ml表示。 （2）细菌内毒素的限值（L） ：为保证用药安全，给每一种药物规定了相应的限值，只要低于该限值，按照规定给药途径即为安全。常