单克隆抗体的主要制备步骤.docxVIP

单克隆抗体的主要制备步骤 (1) 抗原选择 选择可以诱导单克隆抗体产生的抗原，这取决于抗体用途，一般有以下方式：从一组表位图谱型不同但都具有类似化学行为的多肽残基中选择抗原，根据具体抗体功能要求考虑氨基酸的类型、结构特征和数量，或从一种蛋白质或复合物中选择抗原。 (2) 抗原纯化 一般采用分离技术如凝胶纯化，毛细过滤，液体比表面张力分选等对抗原进行纯化，从有机溶剂或皂-甘油系统中抽提出目标抗原。 (3) 抗原药物化 抗原药物化是指给抗原结构中添加有活性的氨基酸残基l以便于有助于抗体分泌和诱导单克隆抗体的分泌。 (4) 动物免疫 使用符合动物禁忌的抗原对动物接种，一般使用的动物有小鼠、大鼠、兔等，一般先对动物预先接种弱毒的另一抗原，然后在鼠脑灰质接种有效抗原，以进行免疫，天然抗体的分泌可以被记录下来，以观测动物不同时期分泌抗体的曲线，以选择最佳免疫时期，并在该时期给动物加强免疫。 (5) 筛选抗体储备 从免疫动物(通常以小鼠为主)未血液提取后利用ELISA法或免疫沉淀法筛选抗体，可以获得更加特异性的抗体。下一步，提取血清中的抗体，以制备抗体芯片。 (6) 单克隆抗体制备 为了确定抗体的应用能力和产量，克隆抗体是需要利用特殊的抗原进行克隆的。抗体芯片的每个克隆可以从细胞培养液、血清中分离出来